WB 不用 GAPDH、β-actin，结果更可靠？原来高分 SCI 早这样干了

师弟

WB 要不跑不齐，要不结果重复性差！555

师弟

样本和抗体马上就要没有了，就连 beta-actin 都让我用完一管了！

emmm.... 其实跑 WB 不用管家蛋白做内参，或许更精准～

师姐

师弟

不用内参？这怎么可能呢？老板不要骂死我！

我的意思是不用管家蛋白，内参还是要有的，不然怎么证明上样量是齐的？

师姐

你了解一下 Stain-Free 技术吧，它是一种无需传统染色和内参的 WB 技术，通过直接检测总蛋白的荧光信号来定量分析目标蛋白，最近隔壁实验室都改做 Stain-Free 了，还发了高分 SCI ，并且也是抑郁课题的研究，你来学学看，现在还有机会免费试用（点击此处申请试用）。

师姐

无需管家内参，结果更可靠？

无需管家内参，结果可靠有趋势

在传统的 WB 实验中，管家蛋白（如 GAPDH、β-actin 等）是必不可少的，用于校正样本之间的差异，从而更准确地反映目标蛋白的表达水平。然而，内参蛋白的表达可能会受到实验条件的影响，导致其表达水平不稳定。例如，在不同的处理组中，内参蛋白的表达可能会因为细胞状态、处理时间等因素而发生变化，从而影响实验结果的准确性。

而在【A Walnut-Derived Peptide WSPSGR Alleviates Depressive-Like Behaviors in Mice via IDO1 Inhibition and Gut Microbiota–Tryptophan Axis Modulation】这一论文中 [1]，研究人员使用了 Stain-Free 总蛋白染色技术替代传统内参，快速、准确地测定每个泳道中的总蛋白量，从而为后续的 Western Blot 分析提供标准化的参考（图 1）。这种方法不仅简化了实验步骤，还提高了结果的可靠性。

图 1 Stain-Free 定量总蛋白（左图），协助检测结肠和脑组织中 IDO1 蛋白的表达（右图）

操作简便，缩短实验周期

传统的 WB 实验步骤繁琐，包括样本处理、蛋白提取、SDS - PAGE 电泳、转膜、封闭、一抗和二抗孵育、显色等多个步骤。每个步骤都需要严格控制条件，稍有不慎就可能导致实验失败。此外，传统的染色不仅耗时，还可能带来误差。

在论文中，研究人员使用了 Stain-Free 技术简化了实验步骤。具体方法如下：

Stain-Free 免染 Western 与传统 Western 实验流程对比表

总的来说，Stain-Free 免染 Western 实验流程以 TGX Stain-Free 免染胶为核心，通过 15 分钟电泳、最快 3 分钟转印实现蛋白快速分离与转移，无需染色 / 脱色，可全程评估实验质量，电泳后 1 分钟激发即可获取总蛋白信号，结合 Image Lab 软件自动完成总蛋白归一化定量，缩短实验时长并提升结果准确性。

20 μg 蛋白即可检测，灵敏度高

Stain-Free 技术的一个显著优势是其高灵敏度和良好的重复性。在论文中，研究人员上样量仅为 20 μg 蛋白。这种低上样量不仅减少了蛋白的使用量，还提高了检测的灵敏度。实验结果重复性非常好，多次实验结果高度一致。

传统 Western Blot：通常需要20～50 μg的蛋白样本，具体量取决于目标蛋白的丰度和抗体的灵敏度。在一些情况下，可能需要50～100 μg或更高。

Stain-free 技术：在论文中，Stain-free 技术的上样量为20 μg，这与传统方法中的高灵敏度实验相当。Stain-free 技术通过提高灵敏度和重复性，使得在较低的上样量下也能获得可靠的结果。

此外，由于实验步骤的简化，也减少了试剂的使用量，从而节省了实验经费。

师弟

原来如此，那我也可以参考这篇论文中的方法，将 Stain-Free 技术设计到我的研究中？

没错，你现在做的抑郁相关蛋白，比如小窝蛋白（Caveolin-1）和神经生长因子受体（p75NTR），都可以通过 Stain-Free 技术来定量总蛋白，结果更准一些。

师姐

师弟

对哦！尤其是 Caveolin-1 ，我跑了 5 次，每次趋势都不一样！

Stain-Free 技术的灵敏度高，实验流程又快捷，而且不需要内参，直接通过总蛋白的灰度值进行校正，避免了内参表达不稳定的问题，结果更可靠哦～

师姐

省时省钱：WB 结果双保险

Stain-Free 免染总蛋白技术利用含有专有三卤化合物的聚丙烯酰胺凝胶，在电泳结束后，仅需 1 分钟的紫外光激发，即可在凝胶中观察到总蛋白的荧光信号，实现蛋白定量和归一化分析，从而避免了传统方法中使用单一管家蛋白（如 GAPDH、β-actin）作为内参的局限性。

其核心优势包括：

1

操作简便快捷，无需额外染色步骤，节省时间和试剂成本。

2

可直接评估总蛋白量，确保上样量一致。

3

提供更全面、准确的蛋白质定量结果，提高实验可靠性。

综上，为了帮大家避免 WB 实验内参不准带来时间与经费上的浪费，我们特意准备了 Stain-Free 免费申请试用以及全套免染 Western 实验流程，请点击下方小程序码，立即获取吧！

注：

1. 相关产品仅限科研使用，不作为临床诊断。

2. Bio-Rad 是 Bio-Rad Laboratories，Inc. 在特定区域的商标。

3. 本活动的最终解释权归伯乐生命医学产品（上海）有限公司。

内容策划：沈佳钰

内容审核：周育红

题图来源：文献截图[1]

参考文献：

[1]. Xiao X, Ma A, Chen Z, Li S, Xia J, Ding S, Jia Y. A Walnut-Derived Peptide WSPSGR Alleviates Depressive-Like Behaviors in Mice via IDO1 Inhibition and Gut Microbiota-Tryptophan Axis Modulation. J Agric Food Chem. 2025 Oct 22;73(42):26780-26792. doi: 10.1021/acs.jafc.5c09940. Epub 2025 Oct 11. PMID: 41074849.