师兄纯化蛋白的不二法门，竟是在实验室修「无情道」？

第一章

师兄手中的移液器正上下翻飞，他需要从混沌悬液中提取项目的命根子——目标蛋白。师兄素有蛋白纯化神来之手的美誉，总被有心之人觊觎：

假笑师妹

师兄，你的这批样品我也想用，帮我提个蛋白呗？

-话音未落，蹭料师姐的手已伸到眼前-

洗涤缓冲液江湖救急，借我使使！

蹭料师姐

-急性子博后直接将他的粗提液怼了过来-

急性子博后

兄台，先帮我提一个试试，你的样品先放冰箱！

第二章

「三面夹击」下，师兄嘴角微扬，手中的移液器划出一道优雅的弧线，祭出破局之法：

师兄

「选择性耳背」——对周遭的无礼请求自动屏蔽，眼中只有离心管中那片微观宇宙。

师兄

「铁手结界」——起身护住关键试剂，口中轻念护身咒语：「退！退！退！」，手上步骤却行云流水，丝毫不乱。

第三章

师兄已优雅地将澄澈的纯蛋白液收入管中，杂蛋白在废液缸里发出无声哀嚎，他转向我，眉梢一挑：

师兄

要点可都记下了？

-我自信满满-

蛋白纯化的核心就是学会拒绝，保持专注。

-师兄一个趔趄，差点摔了样本-

师兄

秘诀是让你用亲和纯化磁珠法纯化！它的简便和高效，才是真法宝啊！

与传统的蛋白质纯化方法相比，亲和纯化磁珠作为一种高效、便捷的工具，正在逐渐成为实验室的首选。如果您正在进行蛋白纯化实验，或者有蛋白纯化需求，即日起至 2025 年 10 月 28 日，可识别下方二维码，花 2 分钟参与纯化磁珠有奖问卷填写，有机会获得文件袋或定制笔记本！

师兄小课堂

亲和磁珠纯化具有以下优势显著的优势

操作简便：磁珠的磁性特性使得分离与回收过程变得简单高效，减少了实验操作的复杂性和时间消耗。

可扩展性：无论是小规模实验还是高通量筛选，亲和纯化磁珠都能轻松应对，满足不同实验需求。

兼容性强：适用于多种样本类型，包括细胞裂解液、血清和组织提取液，广泛应用于基础研究、药物开发和临床诊断等领域。

亲和纯化磁珠法纯化蛋白有五个关键要点

充分重悬：磁珠静置后会沉降，取用前必须通过涡旋使其成为均匀的悬液。

温和混匀：在整个结合和洗涤过程中，要通过轻柔的翻转或吹打来混匀磁珠与液体。避免使用涡旋损伤蛋白或磁珠。

完全分离：将管子置于磁力架上后，务必静置等待溶液完全变清澈，确保所有磁珠都被磁性吸附到位后。

小心移液：分离后，使用移液器小心地吸弃上清液，枪头应远离聚集的磁珠。切勿采用倾倒的方式。

保持湿润：在整个操作过程中，绝对不能让磁珠干燥。一旦磁珠变干，会极大地增加非特异性吸附。

通过使用亲和纯化磁珠，研究人员能够更快速地获取高纯度的蛋白质，为后续的功能研究和应用奠定坚实基础。默克的蛋白纯化磁珠服务是一套为现代生物学实验室设计的「精炼」工具，它通过将分离步骤极致简化，极大地提升了蛋白纯化的效率与体验，特别适合在高通量、自动化、快速验证的场景下替代传统方法。

Anti-FLAG® M2 磁珠：高效的 FLAG® 标签蛋白纯化和 IP 方案

Anti-FLAG® M2 抗体可识别融合蛋白 N 端、Met-N 端或 C 端的 FLAG® 八肽序列（N-Asp-Tyr-Lys-Asp-Asp-Asp-Asp-Lys-C），ANTI-FLAG® M2 亲和磁珠（货号：M8823）是结合 ANTI-FLAG® M2 小鼠单抗、平均直径为 50 μm 的超顺磁铁包覆的 4% 琼脂糖微珠，提供一种简单、便捷的方法，用于从哺乳动物、细菌和植物提取物中对 FLAG® 标签融合蛋白进行蛋白纯化、免疫沉淀和蛋白互作研究。

特点和优势：

高特异性：纯化得到的蛋白纯度高，通常无需进一步纯化

高效便捷：磁性特性允许快速从悬浮液中分离磁珠，结合磁力平台轻松实现高通量操作

高可重现：简化的操作流程，避免样品损失，结果更可控，目的蛋白定量更精确

应用举例：

高效捕获 FLAG® 标签蛋白：磁力架辅助和洗脱方法优化

ANTI-FLAG® M2 亲和磁珠识别并捕获 FLAG® 肽融合蛋白，结合磁力架即可高效实现小规模的 FLAG 标签蛋白纯化和 IP 操作。

Anti-FLAG® M2 磁珠结合的融合蛋白可通过多种方法洗脱，包括肽竞争法、酸性法和 SDS-PAGE 上样缓冲液法。

本文对三种洗脱方法进行了比较。结果表明：

1

3X FLAG® 肽竞争和酸性（pH 2.5～3.0）洗脱法对 Anti-FLAG® M2 磁珠的洗脱最为高效。这类磁珠不适合碱性洗脱（pH 8～10）

2

用 3X FLAG® 肽洗脱时，样品需与 100～150 ng/µL FLAG 肽共同孵育 30 分钟，酸性洗脱时，与 0.1 M 甘氨酸-盐酸（pH 2.5～3.0）的孵育时间则不到 10 分钟，延长甘氨酸-盐酸的洗脱时间并不能增加蛋白洗脱量。

3

使用 SDS-PAGE 上样缓冲液洗脱的条件较为简单，但由于上样缓冲液中的 SDS 造成 M2 抗体变性，凝胶电泳出现了对应 anti-FLAG® 抗体重链和轻链的条带。

使用三种洗脱方法的小规模 anti-FLAG® M2 磁珠免疫沉淀实验方案

比较 ANTI-FLAG® M2 磁珠免疫沉淀的三种洗脱方法。St = 起始材料；3X = 3X FLAG® 肽，pH = 2.5 甘氨酸

比较甘氨酸孵育 5 至 30 分钟范围的洗脱组分。左图：考马斯亮蓝染色凝胶。右图：ANTI-FLAG® M2 抗体的免疫印迹。

PureProteome™ 磁珠：高通量蛋白纯化和 IP 方案

默克提供全面、质量卓越的纯化磁珠产品，提供高效的蛋白纯化方案，助力自动化纯化方案。其中，PureProteome™系列磁珠将蛋白/标签试剂共价偶联到顺磁性亲和介质（ 即磁珠） 上，进一步增强了纯化介质的应用性。PureProteome™ 磁珠包括 Protein A/G 混合磁珠、抗体亚型纯化磁珠、镍磁珠等，是抗体/蛋白纯化、血清耗竭、IP、Co-IP 等应用的高效方案。

特点优势：

高结合能力：增加的表面积使结合能力是同类磁珠的 6 倍以上

高特异性：非特异性吸附低，极大地降低了背景，获得高纯度蛋白、抗体

结果一致：简化的操作流程，完全去除缓冲液且无样品损失，更可控

快速高效：增强的结合平衡将孵育时间减少超过 50%

应用举例：

HIS TAG® 蛋白自动化纯化 - PureProteome™ 镍磁珠 & AAW™ 平台

HIS 标签（组氨酸标签）是生物分子纯化中最常用的标签之一，由于其简便性和高特异性，HIS 标签不仅提高了纯化效率，还减少了后续处理的复杂性。然而，在分析数百个新生成的突变体时，筛选重组标签蛋白的表达也是一项具有挑战性的任务。

我们经过验证的自动化方案在 2.5 小时内使用镍-HIS 结合磁珠对 96 孔的细胞浆进行纯化，最终得到的 96 孔分离蛋白可以通过多种方法进一步分析，包括毛细管电泳（CE）、液相色谱-质谱（LC-MS）或其他高通量检测。

PureProteome™ 镍磁珠是自动化纯化的理想选择，因为其相对较高的结合能力（1～5 µg 蛋白/mL 珠悬液）和耐用的珠类型（硅珠）。将这些珠与裂解溶液如 CelLytic™ B 试剂或 BugBuster® 主混合物结合，可以创建高效的裂解和捕获方法，非常适合由 Opentrons® 驱动的 AAW™ 系统。

PureProteome™ 用户指南方案已被编为 Python 代码，经过测试并通过 Millipore® 应用库提供下载。一旦下载到仪器上，它可以用于执行所有液体处理步骤，包括一步裂解和捕获、三次洗涤和两次洗脱步骤，以及所有摇动和磁性分离操作。

手工方法和 AAW™ 方法的产量对比：同时展示了用于大肠杆菌表达的两个构建体，P0A710 和 P0A749。

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内容策划：王丹琦

内容审核：钟可可

题图来源：图虫创意