ELISA试剂实验：小鼠IL-1β试剂盒组成及实验流程分享

仅供科研

使用目的：

本试剂盒用于测定小鼠血清、血浆及相关液体样本中白介素1β (IL-1β) 含量。

实验原理:本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠白介素1β (IL-1β) 水平。用纯化的小鼠白介素1β (IL-1β) 抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入白介素1β (IL-1β) ，再与HRP标记的白介素1β (IL-1β) 抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的白介素1β (IL-1β) 呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中小鼠白介素1β (IL-1β) 浓度。

试剂盒组成：

操作步骤：

1、标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。

2、加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

3、温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

4、配液：将30倍（48T的20倍）浓缩洗涤液用蒸馏水30倍（48T的20倍）稀释后备用

5、洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。

6、加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。

7、温育：操作同3。

8、洗涤：操作同5。

9、显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色10分钟.

10、终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

11、测定：以空白孔调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。测定应在加终止液后15分钟以内进行。

计算：倍数，即为样品的实际浓度。以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释