斑马鱼行为篇（132）：斑马鱼糖尿病视网膜病变模型

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糖尿病视网膜病变（diabetic retinopathy，DR）是糖尿病最常见、最严重的微血管并发症之一。

利用成年野生型斑马鱼（AB株，3月龄），转基因型血管内皮细胞增强型绿色免疫荧光蛋白标记Tg（fik：EGFP）品系。所有品系的斑马鱼均在标准的斑马鱼水循环系统中养殖，养殖水pH值为7.5±0.5，水温28±0.5℃，明暗周期为14h∶10h（光∶暗），每日早晚投喂2次丰年虾。

建模：

将3dpf斑马鱼幼鱼持续暴露于130mmol/L葡萄糖溶液3d可构建DR模型，造模成功标准：血糖显著升高、视网膜血管病理性扩张、炎症相关基因表达上调、中性粒细胞数量改变及一氧化氮代谢产物增加。

分组：

分别将3dpf野生型和转基因型Tg（flk：EGFP）斑马鱼幼鱼随机分组：（1）对照组（CG组）：养殖水；（2）模型组（MG组）：130mmol/L葡萄糖；将3dpf的斑马鱼幼鱼随机放置在六孔板中，每孔50尾，将各组工作液容量调整至5mL，每组设置3个平行组。于28±0.5℃的环境温度中、14h光照∶10h黑暗条件下持续处理至6dpf。所有溶液现配现用，每12h更换一次。实验结束后，采用300mg/L三卡因甲磺酸盐溶液对斑马鱼实施安乐死。

观察斑马鱼眼睛大小和体长：

6dpf时，各组随机取野生型斑马鱼幼鱼20尾，麻醉后置于光学显微镜下拍照，随后采用Image View软件测量横轴方向眼睛长度、体长（沿体轴测量从头宽最前端到尾巴最后端的距离）和眼睛面积（首先用Image View软件将斑马鱼眼睛区域圈定，之后利用工具栏的Measure功能进行面积计算得到面积数值）。

测量视网膜血管直径：

随机取各组6dpf转基因型Tg（flk：EGFP）斑马鱼幼鱼30尾，4%多聚甲醛4℃固定过夜。经超纯水洗涤3次（20min／次）后，置于含3%胰蛋白酶的Tris-HCl缓冲液（pH7.8）中37℃孵育90min，再次洗涤后通过震荡（摇床，10min）及移液枪强烈抽吸分离含视网膜血管的玻璃体。Olympus体视显微镜下采集视网膜血管及视盘（OD）图像，选取OD周围3个不同位点，采用Image J软件量化血管直径。

参考文献：

• 赵朵,朱紫潞,段鹏,等.基于转录组学探讨和血明目片改善斑马鱼糖尿病视网膜病变的作用机制[J].国际眼科杂志,2025,25(07):1046-1055.

• Lee Y, Yang J. Development of a zebrafish screening model for diabetic retinopathy induced by hyperglycemia: Reproducibility verification in animal model. Biomed Pharmacother. 2021 Mar;135:111201.

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