复方2区if5+: 桂枝茯苓丸对子宫腺肌病线粒体吞噬的调节作用

【写在前面】：本期推荐的是由中国长江三峡大学宜昌第二人民医院、三峡大学国家中医药管理局中药药理三级实验室、中国长江三峡大学医学与健康科学学院等研究团队合作近期发表于Journal of Ethnopharmacology(IF5.4）的一篇文章，揭示桂枝茯苓丸对子宫腺肌病线粒体吞噬的调节作用。

【期刊简介】

【题目及作者信息】

Regulation on mitophagy in adenomyosis by Guizhi Fuling Wan

民族药理学相关性

桂枝茯苓丸（GZFLW）是一种源自《金匮要略》的经典草药制剂，已被广泛用于治疗疼痛相关疾病。虽然其对以严重痛经为特征的子宫腺肌病（AM）的治疗效果有据可查，但其潜在的药理学机制仍然难以捉摸。新的证据表明，子宫内膜组织中的缺氧线粒体损伤是AM的病理标志，其中通过PINK1/Parkin信号通路进行的线粒体吞噬调节在线粒体质量控制中起着关键作用。尽管某些植物药物在缺氧条件下显示出调节线粒体吞噬的特性，但GZFLW在AM发病机制中对这一过程的具体调节作用值得系统研究。

目的

通过体内和体外综合方法阐明GZFLW在AM中的自噬调节机制。

方法

建立了异基因垂体移植诱导AM小鼠模型。药效学评估包括热板试验和血清癌症抗原125（CA125）定量，同时监测血液尿素氮（BUN）和丙氨酸氨基转移酶（ALT）水平以进行肝肾毒性筛查。组织病理学特征采用苏木精-伊红（H&E）染色和透射电子显微镜（TEM）进行超微结构分析。通过蛋白质印迹法测定PINK1/Parkin通路成分（PINK1、Parkin、OPTIN、NDP52、P62）的蛋白质表达。从临床AM标本中分离出的原代子宫内膜基质细胞（ESCs）通过经孔迁移/侵袭试验进行了功能评估，并辅以线粒体膜电位（MMP）和活性氧（ROS）的流式细胞术定量。分子对接模拟评估了GZFLW生物活性成分与PINK1/Parkin蛋白之间的配体-受体相互作用。本研究方案经中国长江三峡大学医学伦理委员会批准（编号2022CA002）。

结果

组织病理学验证证实AM模型建立成功。ELISA显示AM小鼠的CA125水平与对照组相比显著升高（P<0.05），GZFLW治疗组的CA125水平显著降低（GET:P<0.05，GZFLW-L:P<0.01）。ALT/BUN水平没有出现组间差异，表明没有肝肾毒性。GZFLW治疗减轻了建模后的痛阈降低（与对照组相比P<0.05）。透射电镜分析显示AM子宫内膜的线粒体病理，包括结构变形、线粒体数量减少和自噬体积累，所有这些都通过GZFLW-L干预得到改善。Western blot显示AM组PINK1（P<0.01）、Parkin、OPTIN和NDP52（P<0.05）上调，随后GZFLW-L给药后下调（P<0.05）。在体外，AM ESCs表现出MMP去极化（P<0.05），GZFLW治疗逆转了MMP去极化，同时抑制了迁移/侵袭能力（P<0.01，P<0.05）、ROS减少（P<0.05）和PINK1/Parkin通路激活减弱。分子对接证实了GZFLW植物成分与PINK1/Parkin靶标之间的强结合亲和力（结合能<-5.0 kcal/mol）。

结论

这项研究表明，GZFLW通过靶向调节PINK1/Parkin介导的自噬轴对AM发挥治疗作用，支持其作为AM管理线粒体靶向治疗策略的潜力。

图文摘要

【前言】

子宫腺肌病（AM）是一种常见的妇科疾病，其特征是子宫内膜样组织（包括腺体和基质）异常浸润到子宫肌层中。临床上，约90%被诊断为AM的女性出现月经过多、痛经和慢性盆腔疼痛等症状。此外，AM已被确定为约10%不孕病例的促成因素，突显了其对生殖健康的重大影响。AM的发病机制与子宫内膜-子宫肌层界面（EMI）的复杂微环境密切相关，EMI在疾病进展中起着关键作用。尽管AM发展的确切机制尚不完全清楚，但EMI内的缺氧已被认为是其发病机制的关键触发因素。最近的研究集中在AM中缺氧诱导的线粒体损伤和修复机制上，揭示了线粒体功能障碍可能导致疾病的进展。值得注意的是，PTEN诱导的推定激酶1（PINK1）介导的有丝分裂吞噬在缺氧条件下被激活，与增强细胞增殖和侵袭能力有关。我们最近的研究结果进一步表明，AM中PINK1介导的线粒体吞噬作用升高会导致线粒体损伤，这可能会导致在这种情况下观察到的异常侵袭行为。

在中药制剂中，桂枝茯苓丸（GZFLW）已被广泛用于治疗与“血瘀”相关的疼痛，这是一种被认为与AM发病机制密切相关的中医证候。实验证据表明，针对“血瘀”的中医疗法可以改善微循环，缓解慢性缺氧状况。尽管GZFLW已被证明能有效抑制异位子宫内膜细胞的活性，但其对AM治疗作用的确切分子机制仍知之甚少。

【结果部分】

1.GZFLW对AM小鼠的治疗效果。

2.异位子宫内膜超微结构的变化。

3.GZFLW抑制AM小鼠线粒体自噬相关蛋白的表达。

4.GZFLW细胞活力。

5.GZFLW对AM ESCs迁移和侵袭的抑制作用。

6.GZFLW抑制了AM ESCs中与有丝分裂相关的蛋白质的表达。

7.GZFLW对AM ESCs中MMP的影响。

8.GZFLW对AM ESCs中ROS水平的影响。

9.GZFLW对AM ESCs线粒体自噬水平的影响。

10.分子对接的视觉结果。

【结论与讨论】

研究表明，GZFLW通过PINK1/Parkin信号通路促进有丝分裂，在缓解AM方面具有巨大潜力。GZFLW治疗可显著降低CA125水平并缓解痛觉过敏。关键的线粒体吞噬相关蛋白，包括PINK1、Parkin、OPTIN、P62和NDP52，被下调，表明线粒体动力学受到调节。此外，GZFLW增强MMP，同时降低AM ESCs中的ROS水平。

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