被停实验后竟因祸得福？师兄透露流式冷门知识点，真是雪中送炭

做了一个月流式，阳性细胞群少得可怜，结果没法用，抗体用空了好几支，导师怒斥：干啥啥不行，花经费第一名，实验停一段时间，禁不起你折腾。

师妹

我想要的那个表型根本分离不出来，是不是抗体不行？

师兄

还有其他可能，比如目标抗原的表达量本身是否就很低？有没有分析过成功的文献案例？

师妹

文献里用兔单抗做出来了，咱们实验室只有鼠抗，难道是因为种属？

师兄

鼠单抗在某些情况下，特别是在检测表达量低、丰度低、免疫原性较弱的指标时，可能因为亲和力不足而导致检测信号弱、分群不清，我上次也遇到类似问题！

师兄

后来换了 ABclonal ABflo® 的兔单抗做出结果了，还剩一点你拿去。ABclonal 最近还推出 400 多款流式抗体试用活动（点此申领试用装），解决你的燃眉之急！

师妹

鼠单抗还有不行的时候，我这就去试试兔的！

做流式实验还在用传统鼠单抗碰运气？很多结果不理想可能就是因为抗体没选对！ABclonal ABflo® 重组兔单抗凭高亲和力、低交叉反应等优势，成为复杂样本检测利器。ABclonal 现推出限时福利，400+流式抗体热门靶点全覆盖，识别下方二维码可免费领（每个课题组最多申请 5 支不同货号抗体，规格：10 T/2.5 μg）！

那么何时该换兔单抗？如何优化操作出「顶刊数据」？本文还为你提供了一份保姆级流式抗体攻略，快来看看吧！

抗体类型精准挑选

鼠单抗和兔单抗作为两大主力「选手」，该如何根据实验需求精准挑选？请参考以下抗体选择指南：

Tips：务必选用经流式细胞术验证的抗体，部分仅适用于 Western Blot 或免疫组化的抗体可能因表位构象差异，导致在流式实验中标记效率低下。

预实验优化标记条件

浓度梯度滴定：对抗体进行梯度稀释后进行染色，摸索最佳抗体使用量。需注意，抗体用量过多不仅会增加实验成本，还可能会因为 Fc 受体的非特异性结合导致分群变差，影响实验结果。

同型对照设置：选择与实验抗体同亚型、同荧光素的同型对照抗体，用于区分非特异性结合信号。尤其在检测弱阳性细胞群时，同型对照可帮助避免假阳性结果。

补偿调节验证：多色实验前，需使用单染样本进行荧光补偿调节，校正不同荧光通道间的光谱重叠。

规范操作减少实验误差

孵育条件控制：抗体通常 4℃ 避光孵育 20～30 分钟，避免室温下非特异性结合增加。对于胞内染色，选择与后续荧光标记兼容的固定剂（如多聚甲醛）和破膜剂（如 Triton X-100），先进行固定破膜处理。

洗涤效率优化：采用离心洗涤结合合适的洗涤缓冲液（含 2% BSA 的 PBS 可减少非特异性吸附），确保未结合抗体充分去除。需注意避免过度洗涤导致细胞损失或抗原表位破坏。

多色标记顺序：遵循「弱荧光→强荧光」的标记原则，优先标记低表达抗原的弱荧光抗体，后标记高表达抗原的强荧光抗体，降低荧光渗漏对结果的影响。

优先选择直标抗体：荧光标记二抗可能带入更多背景杂信号，需要做更多的实验条件优化，实验操作时间长。因此在条件允许的范围内，建议尽量用直接标记的抗体进行实验。

ABflo® 系列流式重组兔单抗堪称「流式利器」！不仅能解决细胞分群不明显的问题，还可应对背景高、批间差异大等常见流式难题，直击传统鼠抗的性能短板。接下来就带你解锁这款重组兔单抗的硬核实力！

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重组兔单抗：流式抗体的革新之选

为何以重组兔单抗为流式核心？兔源抗体相较鼠抗主要具备以下优势：

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ABflo® 系列流式重组兔单抗的核心优势

特异性高

ABflo® 流式重组兔单抗经多元化样本（如阴性样本、敲除样本、过表达样本；细胞系与原代细胞等）验证，特异性高，结果可信。与市场主流品牌对标检测，效果优秀。

ABflo® 流式抗体检测阴性样本无阳性群，而在阳性样本上阴阳分群效果优于竞品，抗体特异性高。

极佳信噪比

每一支 ABflo® 流式重组兔单抗都经过了内部严格的最佳用量摸索实验，有着极佳的信噪比。

ABflo® 594 Rabbit anti-Human CD62L/L-Selectin mAb （A24632）

结果显示，采用不同浓度的 ABflo® 594 标记的 CD62L 流式抗体，在 Human PBMC 样本上进行滴定实验，并分别计算出不同浓度下阴、阳性细胞群体的 MFI 值（平均荧光强度）及其 SNR 值（信噪比）。在 156.25～5 000 ng/mL 的范围中，我们的抗体均可以对 PBMC 有效分群，有着优异稳定的信噪比。

批间一致性高

ABflo® 流式重组兔单抗采用体外重组表达技术生产，标准化流程解决了传统杂交瘤技术的遗传漂移问题，批间差异小，结果重复性好。

每批抗体生产后均会留样，与以往批次进行同步验证，CV% 在 10% 以内，保证批间一致性。

纯度高

抗体性能与抗体纯度密切相关，ABflo® 流式重组兔单抗纯度经由 SDS-PAGE（还原样本与非还原样本）检测和 SEC-HPLC 定量纯度检测，抗体单体纯度可达 98%以上。

SEC-HPLC 定量纯度检测，抗体纯度 > 98%

稳定性好

ABflo® 流式重组兔单抗基于热动力学，进行加速破坏实验验证稳定性，37℃ 存放 28 天模拟 4℃ 保存 4 年，确保抗体性能长期稳定。

结果表明，经过稳定性测试的抗体在 37℃ 存放 7～28 天，细胞阴阳分群、MFI 和染色指数均无明显差异，产品具有良好的稳定性。

靶点及荧光染料丰富，轻松搭配

ABclonal 目前有 1,000+ 流式抗体产品在售，涉及人、小鼠、大鼠、猴、犬、猪、猫等多个物种，17+ 种荧光素可选，轻松搭建多色流式实验方案。

小鼠 PBMC_TNK 四色分型

人 PBMC_TBNK 七色分型

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ABclonal 如何研发生产出优质的 ABflo® 流式重组兔单抗？

ABclonal依托自主 SMab® 单 B 细胞抗体平台开发流式抗体，通过单个 B 细胞体外培养与大规模重组表达实现批量生产，全流程严格把控抗体特异性、信噪比、批间一致性、纯度及稳定性。

主要开发流程简介：

抗原免疫

根据靶点背景及研发目标，采用多元化的抗原免疫策略，如真核活性蛋白、稳转细胞株、LNP-mRNA、修饰性多肽、小分子抗原等，对兔子进行免疫，产生大量抗原特异性B细胞。

B 细胞分选和培养

将兔脾脏提取分离为单细胞后，通过流式分选，将表达目的抗体的 B 细胞分选为单个 B 细胞，然后进行单 B 细胞培养。

筛选与验证

收集单 B 细胞培养后的上清，通过FACS、Elisa、WB 初筛阳性克隆，扩增后提取抗体基因构建表达载体，在 293T 细胞二次验证，最终重组表达获得目标抗体。

ABclonal 流式解决方案

不止于流式抗体

ABclonal 流式解决方案，不止于流式抗体。除了覆盖免疫、肿瘤、干细胞等方向的高亲和力、高特异性流式抗体，ABclonal 还自主推出ABCyte 流式细胞仪，满足从样本采集到结果分析的一体化检测需求。

除了细胞水平的流式检测，ABclonal 也布局微球流式，提供 ABplex 多指标流式联合分析系统及配套多因子检测试剂盒，实现多靶点同时检测、提高数据通量与实验效率。ABclonal 致力于构建覆盖「优质流式试剂 × 精密仪器 × 专业服务」的流式平台，为科研工作者提供更系统、高效的一站式技术支持。靠谱的流式抗体，尽在 ABclonal，识别下方二维码，400+流式抗体免费试用！

内容策划：王丹琦

内容审核：吴军

题图来源：图虫创意