RFect V2-RNAiMAX的国产替代转染试剂

siRNA转染是分子生物学常见的实验之一。在siRNA转染实验中，siRNA转染试剂的选择尤为关键。目前，实验室常用的siRNA转染试剂主要有赛默飞的Lipo3000、 RNAiMAX和常州百代的RFect V2。其中，RNAiMAX是国际公认的siRNA转染试剂权威产品，RFect V2是海归科学家研发的国产知名siRNA转染试剂，拥有数百篇SCI论文加持，很多实验室反应其转染性能非常优异。RNAiMAX价格昂贵，在关税战的影响下，其价格可能进一步上调，一般研究者无力承受，而RFect V2价格只有RNAiMAX的四分之一左右，价格优势明显。与RNAiMAX比较，RFect V2的siRNA转染性能究竟如何，我们实验室进行了比较系统的研究。

一、siRNA转染性能

siRNA转染性能，无疑是评价一款siRNA转染试剂实力的首要指标。不仅要看转染阳性率，更要看基因沉默效率。

我们实验室按照两款试剂的说明书，以24孔板的推荐比例，在用于做体外质控的Hela细胞融合度达到30-50%时，分别以1.5μL的RFect V2和1.5μL的RNAiMAX转染试剂配制转染复合物进行转染，48h在荧光显微镜下观察其转染阳性率。结果显示，两者的转染阳性率都可达90以上，说明同等量的转染试剂，RFect V2与RNAiMAX的转染阳性率不相上下。

如果说转染阳性率只是一个直观的结果，并非是验证两者转染性能的“金标准”，那么还需要通过RT-qPCR来检测其基因沉默效率从而得出结论。为此，我们将能够敲降SSB基因的小干扰核酸分别通过RFect V2和RNAiMAX转染进Hela细胞，利用RT-qPCR检测转染24h后SSB的mRNA表达水平。如图所示，使用RNAiMAX转染的实验组CT值分别为21.91、21.95，使用RFect V2实验组的荧光定量检测结果相比于RNAiMAX略高出0.13-0.14个CT值，两者结果非常相近，表明RFect V2和RNAiMAX转染siRNA沉默基因的效率基本一致。

二、细胞毒性

细胞死亡率对细胞转染实验结果的影响很大，尤其是我们在研究基因沉默效率时，死亡细胞的那部分也会表现为目标mRNA表达水平的降低，因此siRNA转染试剂必须对细胞作用温和，才能实现实验结果的准确性与可靠性。

RFect V2使用了新型可降解纳米材料，细胞毒性极低，并且成分上区别于以阳离子脂质体为主要成分的RNAiMAX。众所周知，siRNA转染试剂的毒性越低，其要求的转染密度也越低。在这方面，无论是RNAiMAX，还是RFect V2，都做到了转染密度在30-50%时就能取得高效的转染结果。根据我们实验室的数据，使用RNAiMAX转染Hela细胞后，细胞死亡率约为10%左右，使用RFect V2转染Hela细胞后，细胞死亡率只有5%左右，似乎还略优于RNAiMAX。可以说，RFect V2在细胞毒性方面的表现是令人惊喜的。

三、操作简便性

以研究者的角度出发，实验的简便性也十分重要。主要看两方面，一方面是需不需要特殊培养基，第二方面是需不需要换液。

RNAiMAX的说明书中明确指出，需要使用Opti-MEM减血清培养基来稀释转染试剂和siRNA，而试剂盒内并不提供这种培养基，因此实验者需要额外购买Opti-MEM。RFect V2试剂盒内配置有专研的转染增强剂，可用其稀释转染试剂和siRNA，不需要研究者再额外购买Opti-MEM，而且转染增强剂还可以提高siRNA转染效率。

在换液问题上，RFect V2不仅有很强的抗血清干扰能力，不需在转染前更换无血清培养基，而且由于对细胞毒性极低，因此也无需在转染4-6h后进行换液。RNAiMAX同样在说明书中表明无需换液，但有些科研者在分享转染经验时还是建议转染后4-6小时最好更换培养液，可能对于一些敏感的细胞如果不及时更换新鲜的培养基，细胞死亡率还是比较高的。

显然，RFect V2在使用上更为方便，不需要额外购买特殊培养基，也不需要在转染4-6小时后换液。

综合看来，RFect V2在siRNA转染性能方面与RNAiMAX近似，在细胞毒性方面略优于RNAiMAX，在使用便利性方面则显著优于RNAiMAX，在siRNA转染方面可完全替代RNAiMAX。在美国政府高筑关税围墙，意图限制我国科技创新的大背景下，RFect V2将会受到越来越多研究者的认可，最终成为国内siRNA转染领域的主导品牌。