重组胶原蛋白质量如何保障？看看国家行业标准如何规范

胶原蛋白(collagen)是一类哺乳动物细胞外基质中的主要结构蛋白，广泛地存在于皮肤、 骨骼、肌肉等组织中，主要参与细胞的增殖、分化、迁移和信号传递等生理生化行为，对组织细胞等起着支撑、修复、保护的作用。

由于胶原蛋白具有良好的生物学特性，其在组织工程、临床医学、食品工业、包装材料、化妆品、医学美容、生物材料以及医疗器械等方面都有着广泛的应用。

重组胶原蛋白作为一种广泛应用的生物材料，其纯度和含量对研究成果和临床应用至关重要。而重组胶原蛋白的纯度及含量测定则成为了评价其质量的重要指标之一，用以确保产品的质量和安全性，为后续产品的生产和应用提供可靠的保障。

目前，伴随着研究的发展，蛋白纯度鉴别方法也在不断地更新，如SDS-PAGE法、SEC-HPLG法、Brandford法、Lowry法以及其他许多方法在纯度测定中得到了广泛的应用，但是如此多的检测方法中仅有两种属于国家标准中重组胶原蛋白的检测方法，同时根据纯度检测方法 还 阐 明了 有 关重组胶原蛋白含量测定的方法。

2022年1月18日消息，NMPA对外发布公告，共计3项医疗器械行业标准已审定通过。

其中，YY/T 1849-2022《重组胶原蛋白》明确规定了重组胶原蛋白的质量控制要求、检测指标及其检测方法等，适用于作为医疗器械原材料的重组胶原蛋白的质量控制，以及文件中明确表示，重组胶原蛋白的纯度检测标准方法为“电泳法”“高效液相色谱法”含量检测方法为“凯氏定氮法”“特征多肽法”。

电泳法/高效液相色谱法为国家标准纯度检测方法

什么是电泳法/高效液相色谱法？

电泳法

蛋白质纯度鉴定电泳，是利用电泳技术鉴定样品蛋白质的纯度。常用的电泳技术为聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）法，SDS-PAGE法分辨率高、设备和操作简单、成本较低。

SDS-PAGE鉴定蛋白质纯度

SDS是一种阴离子表面活性剂，能打断蛋白质的氢键和疏水键，并按一定的比例和蛋白质分子结合成复合物，使蛋白质带负电荷的量远远超过其本身原有的电荷，掩盖了各种蛋白分子间天然的电荷差异。因此，不同蛋白质和SDS的复合物在电泳时的迁移速度仅由蛋白质的分子量决定。

SDS-PAGE可根据不同蛋白质分子大小的不同所产生的不同迁移率将蛋白质分离。

如果蛋白质样品中含有多个蛋白质或者纯化蛋白样品中含有其他杂蛋白，经过SDS-PAGE分离后不同的蛋白质会被分离成多个蛋白条带。如果纯化的样品中只含有同一种蛋白质，蛋白质样品电泳后，则只显现一条蛋白条带，因此，SDS-PAGE技术可以对蛋白质样品的纯度进行分析鉴定。

高效液相色谱法

HPLC（High Performance LiquidChromatography）高效液相色谱法，也称为高压液相色谱，是一种用于分离、鉴定和量化混合物中的每种成分的分析化学技术。

它依靠高压泵将含有样品混合物的液体通过充满固体吸附材料的色谱柱，样品中的每种成分与吸附材料的相互作用略有不同，导致不同成分的流速不同，并导致成分在流出色谱柱时发生分离。

蛋白质纯度是蛋白质分析研究中一个重要的理化参数，不纯的蛋白质样本可能会导致实验结果不准确，从而影响进一步蛋白质分析。

利用HPLC进行蛋白质纯度鉴定主要根据检测器所检测到的色谱图来实现，根据谱图的特异性吸收峰的数量进行判断，HPLC法可以检测丰度小于0.1 ug的杂蛋白，灵敏度较高，是比较精确的蛋白质纯度测定方法。

凯氏定氮法/特征多肽法为国家标准含量测定方法

什么是凯氏定氮法/特征多肽法？

凯氏定氮法

凯氏定氮法在被国内外视为蛋白质含量的标准检验方法，可作为衡量其他蛋白质含量检测方法准确性的标准。

蛋白质是含氮的有机化合物,样品与浓硫酸和催化剂一同加热消化，使蛋白质分解，其中碳和氢被氧化为二氧化碳和水逸出，而样品中的有机氮转化为氨，与硫酸结合生成硫酸铵。然后加碱蒸馏使氨游离，用硼酸吸收后，再以硫酸或盐酸标准溶液滴定，根据酸的消耗量乘以换算系数（乳及乳制品换算系数为6.38），即为蛋白质的含量。

特征多肽法

液相质谱法基于特征多肽鉴定的胶原蛋白多肽检测，是一种通过鉴定胶原蛋白特异的多肽片段来检测胶原蛋白的方法。该方法基于液相色谱-质谱联用技术（LC-MS/MS），通过检测肽段的质谱信号来定性和定量样品中的胶原蛋白多肽。

将胶原蛋白试样溶解，加热变性后进行胰蛋白酶酶解，释放特征多肽；再用液相色谱质谱法测定。以不同类型胶原蛋白特征多肽的保留时间和二级子离子碎片的质荷比进行定性和确证，用外标法或内 标法进行定量。

用合成的不同类型胶原蛋白特征多肽作为标准品，实现外标法定量检测；用合成的相同特征多肽序列的同位素标记特征多肽与非同位素标记特征多肽按一定比例混合，实现内标法定量检测。同位素内 标法有助于改善基质效应对测定准确性的干扰。

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