Annexin V-iFluor 350 标记（conjugate）的应用与特点分析。

品名：Annexin V-iFluor 350 标记，Annexin V-iFluor 350 conjugate
产地：西安齐岳生物
用途：科研
一、产品描述：
Annexin V-iFluor 350 是一种经典的凋亡检测探针，适用于荧光显微镜与流式细胞术。Annexin V 是一种结合磷脂酰丝氨酸（PS）的蛋白，正常情况下PS位于细胞内膜，而在细胞发生早期凋亡时，PS会外翻暴露于细胞外膜表面。利用荧光标记的Annexin V，可实现对凋亡细胞的高灵敏度检测。iFluor 350 是一种具有优良光稳定性、激发波长为350 nm、发射波长约为440 nm的蓝色荧光染料，与Annexin V偶联后，适用于多色标记实验中蓝色通道的凋亡检测。
二、化学性质：
iFluor 350 属于羧酸类荧光染料，分子结构稳定，水溶性好。其激发与发射特性使其适配常见紫外激发光源（如DAPI通道），可与FITC、PE、APC等染料联合使用而无明显串扰。该染料通过NHS酯活化形式与Annexin V蛋白中的赖氨酸残基形成稳定的共价键，偶联效率高，光漂白速率低，适合长时间成像或高通量分析。

三、制备方法：
Annexin V-iFluor 350 的制备主要包括以下步骤：
蛋白纯化与缓冲优化：选用高纯度重组人源Annexin V，进行缓冲体系（如pH 7.4的PBS）调整，确保蛋白结构稳定。
染料活化与偶联：使用活化的iFluor 350 NHS酯与蛋白反应，控制摩尔比（如1:3至1:5）以获得*佳标记效率。反应在避光条件下4°C或室温下进行1~2小时。
去除游离染料：通过凝胶过滤柱（如Sephadex G-25）或透析去除未结合染料。
质量检测与分装：通过SDS-PAGE、紫外/可见吸收光谱或荧光光谱确认偶联效率和纯度，最后按使用浓度分装保存于4°C或-20°C。
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