浙江
隔壁组流式检测 RNA 又发顶刊了，而我们还在流式实验上苦苦挣扎，我们「差」在哪？（文末还有惊喜！）
菜鸡大家庭
师姐
师弟，你怎么愁眉苦脸的？
别提了！导师说我的课题要做流式细胞术，我还是一头雾水，一会儿做配色，一会要调补偿！真不知道咋整？
师弟
师兄
流式确实有点难度，当年刚开始我也是摸不着北。不仅在流式配色上尽可能减少荧光染料之间的光谱重叠，避免补偿。还要在样本设计时做好对照，才能保证数据准确。
师姐
别说你了。其实我也有好多问题，文章被高分期刊退回，理由是不够创新。现在已经做了一堆流式数据，我也不知道咋办。
大家别慌，我去趴隔壁墙角听听他们是咋做流式的！
师弟
你有过实验室里的这些困惑吗？别灰心，我们特意在5 月 15 日 14 点带您轻松上手流式实验！赛默飞世尔科学技术专家联合丁香园将带来《流式检测「升维」前沿应用与高维流式避坑指南》在线直播，从配色、补偿到数据分析，全方位总结流式避坑技巧，细致讲解多色流式技术。还有 PrimeFlow RNA 技术详解及高分文献分享，帮助大家顺利实现多色共染和 RNA 共标。
现成功报名直播的前 400 名幸运者免费获得赛默飞上百页纸质版的《流式细胞分析实验方案》，包含流式样本制备、细胞刺激、补偿调节及表型分析等 Protocol，干货满满，赶快来领取！在直播当日，更有机会获得天猫精灵、蓝牙耳机、京东卡及外交官双肩包等惊喜好礼～
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从样本制备到流式上机检测，我们还会遇到很多的实验细节和特殊样本处理问题。结合多年实验经验，精心总结《流式细胞分析实验方案》，你想知道的实验细节在这里都能找到答案。比如大家经常遇到的胞内抗原染色方案：
1. 细胞内（胞质）蛋白染色：适用于检测在体外或体内活化后的细胞，胞浆内蛋白、细胞因子或其他分泌蛋白。
1）细胞刺激：利用细胞刺激混合物（加蛋白质转运抑制剂）刺激细胞 4 h，促进效应因子的产生。
2）收集细胞并制备成单细胞悬液；利用可固定细胞活性染料进行死活染色（可选）。
3）细胞表面抗原染色，4 ℃，避光 15～30 分钟。
4）最后一次洗涤后，弃掉上清液，充分涡旋混匀样本，通常保留 100 μL 左右体积。
5）加入 100 μL 流式胞内固定液以固定细胞，涡旋混匀，室温，避光孵育 20～60 分钟。
6）加入 2 mL 1X 流式破膜缓冲液， 室温 400～600 x g 离心 5 分钟，弃掉上清液。
7）加 100 μL 1X 流式破膜液重悬细胞，并加入流式胞内抗体，室温，避光孵育 20～60 分钟。
8）加入 2 mL 1X 破膜液，离心后弃掉上清液，以适当体积的流式细胞染色缓冲液重悬细胞。
2. 细胞内（核内）蛋白染色：适用于在单细胞水平上同时检测细胞核内抗原、细胞胞浆抗原以及细胞表面抗原。
1）收集细胞并制备成单细胞悬液；利用可固定细胞活性染料进行死活染色（可选）。
2）细胞表面抗原染色，4 ℃，避光 15～30 分钟。
3）最后一次洗涤后，弃掉上清液，充分涡旋混匀样本，通常保留 100 μL 左右体积。
4）加入 1 mLFoxp3 固定/破膜工作液，涡旋混匀，在 2～8 °C 或室温，避光孵育 30～60 分钟。
5）加入 2 mL 1X 破膜缓冲液，室温 400～600 x g 离心 5 分钟，弃掉上清液 。
6）用 1X 破膜缓冲液重悬细胞 ，终体积调至约 100 μL，加入流式胞内抗体，室温，避光孵育 30 分钟以上。
7）加入 2 mL 1X 破膜缓冲液，离心后弃掉上清液，以适当体积的流式细胞染色缓冲液重悬细胞。
更多流式细胞实验方案及技巧均会展示在手册中，快来点此报名，前 400 名即可获得上百页流式实验纸质版手册～
心动福利双响炮
报名礼：400 份流式实验步骤干货资料
前 400 名扫码填写问卷、最终报名成功的幸运者，即可获得赛默飞上百页《流式细胞分析实验方案》。这本手册中包含了全面的流式实验步骤，帮助您更好地完成流式实验，最终得到高质量流式结果。
直播当日奖品：5 月 15 日当天直播 99 份惊喜好礼
直播当天抽奖环节，99 位流式幸运官将有机会获得天猫精灵蓝牙音箱、蓝牙耳机、超值京东卡、外交官双肩包、笔记本电脑支架及赛默飞抗体系列冰盒等丰厚精美礼品。
注：以上所有奖品预计将于 5 月下旬陆续发出。
内容策划：邹礼平
内容审核：吴军
题图来源：赛默飞
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