一、检测原理
RPR检测通过检测患者血清中的反应素(抗心磷脂抗体)进行梅毒筛查,属非特异性抗体检测。阳性结果需经TPPA等特异性检测确认。
二、样本采集与处理
- 采集:静脉采集3-5mL全血于无抗凝剂试管(或含分离胶)。
- 处理:室温凝固后,离心(3000rpm,10分钟),分离血清。避免溶血、脂血或污染。
- 保存:2-8℃保存≤72小时,长期保存需-20℃以下,避免反复冻融。
三、试剂与仪器准备
- 试剂:有效期内RPR试剂盒(含抗原悬液、对照卡片、滴管/针头)、阳性/阴性对照品。
- 仪器:水平旋转仪(100±2rpm)、移液器、计时器。
- 环境:室温(23-29℃),避免强光或震动。
四、检测步骤
- 加样
- 定性检测:50μL血清滴于卡片圆圈内,扩展至直径约18mm。
- 定量检测(滴度测定):用生理盐水倍比稀释血清(1:2至1:64等),取50μL各稀释度样本。
- 加抗原:轻摇抗原瓶,垂直滴加1滴(17μL)抗原悬液于各样本区。
- 混匀与反应
- 使用水平旋转仪(100rpm)旋转8分钟,或按说明书调整。
- 手动操作时,摇动卡片8分钟,确保充分混匀。
五、结果判读
- 阴性:均匀细小颗粒,无凝集(报告“非反应性”)。
- 阳性:肉眼可见黑色凝集块(报告“反应性”及最高稀释度滴度)。
- 不确定:弱凝集需重复检测或结合其他评估。
六、质量控制
- 对照检测:每批次需同时测试阳性、阴性对照,结果符合预期方有效。
- 质控记录:记录试剂批号、有效期、操作者及质控结果。
- 仪器校准:定期检查旋转仪转速及稳定性。
七、注意事项
- 假阳性:妊娠、自身免疫病、HIV等可能导致,需结合临床。
- 生物安全:穿戴防护装备,按医疗废物处理样本及耗材。
- 治疗后监测:治疗后3、6、12个月复查,滴度下降4倍提示有效。
八、报告与解释
- 阳性:建议TPPA确认,结合病史评估活动性感染。
- 阴性:不能完全排除梅毒(如窗口期或晚期潜伏感染)。
九、局限性
RPR仅为筛查试验,不可单独确诊。高滴度可能提示疾病活动,但需综合判断。
遵循试剂说明书操作,确保检测准确性,及时更新操作规范。
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