实验室细胞培养过程中微生物污染常见问题及及解决方案，提供北京上海广州实验室细胞房污染上门消毒服务

细胞培养过程中，微生物污染是常见且棘手的问题。下面将针对细菌、霉菌、支原体污染等问题进行详细分析与处理。

细菌污染

1. 识别方法

   • 显微镜观察：细菌呈小而快速移动的颗粒，形状多样，如球形（球菌）、杆状（杆菌）或螺旋形（螺旋菌）。

   • pH 变化：培养基 pH 值下降，含酚红的培养基颜色从红色变为黄色或橙色。

   • 培养基混浊：培养基浑浊，有絮状物。

   • 细菌培养检测：取少量疑似污染的培养基涂布到 LB 琼脂平板或血琼脂平板上，在 37°C 培养 24 小时，观察是否有菌落生长。若平板上细菌成片生长，可确认污染；若只有个别菌落生长，可能是操作污染。

2. 处理方法：一旦确认污染，立即弃掉污染的细胞培养物和培养基。用 70% 乙醇或次氯酸钠彻底清洁工作台面、培养箱、离心机等所有接触到污染样品的设备。检查培养基、血清、耗材等无菌材料，严格遵守无菌操作规程，防止再次污染。

1. 识别方法

   • 显微镜观察：霉菌呈分支丝状结构，有菌丝、孢子或孢子囊。

   • 肉眼观察：培养基表面或培养瓶壁上出现毛茸茸、棉絮状的白色、绿色、黑色或灰色斑点或团块。

   • 培养基混浊和颜色变化：培养基浑浊，颜色发绿或发黑。

   • pH 变化：培养基 pH 值下降。

   • 检测：定期检查培养基透明度和颜色变化，发现异味时警惕。

2. 处理方法：立即弃掉污染的培养物和培养基。用 70% 乙醇、次氯酸钠或专门的抗真菌剂彻底清洁所有接触过污染培养物的设备和工具。更换所有可能受污染的耗材。严格遵守无菌操作规程，定期环境监控。

1. 识别方法

   • 荧光染色法：利用 DAPI 或 Hoechst 染色，在显微镜下观察细胞周围或细胞内是否有亮点。

   • PCR 检测：通过 PCR 扩增支原体特异性基因片段，检测细胞培养物中是否存在支原体 DNA。

2. 处理方法：丢弃污染的培养物。用次氯酸钠或乙醇彻底清洁所有接触过污染样品的设备和工作区域。使用支原体去除试剂处理污染细胞培养物，处理后用 PCR 检测验证去除效果。若污染严重或去除不彻底，从冻存的无污染细胞库中重新复苏细胞。

克微生物提供全面的实验室消毒方案。润联生命的实验室消毒产品能够为细胞培养提供可靠的保障，解决细胞培养过程中的常见问题，助力实验室的高效运行。

消毒方案

• 空间消毒：采用干雾过氧化氢灭菌器，结合诺福杀孢子剂，雾化粒径平均达到 3-5 微米，能迅速弥漫充满整个密闭细胞房空间，不放过每一处死角，可对嗜热脂肪杆菌芽孢降低 6 个对数值，实现高效灭菌。

• 局部消毒：

• • 生物安全柜：使用专业的诺福杀孢子剂进行全面消杀，严格按操作规程确保消杀效果且不损害设备。

  • 细胞培养箱：先对培养箱彻底清洁，去除污垢和杂质，然后使用杀孢子剂消杀，同时定期维护和检测。

  • 超净工作台：采用高效的过氧化氢空气消毒系统和诺福杀孢子剂相结合的方式消杀，空气净化系统过滤杂质和微生物，杀孢子剂杀灭残留细菌和孢子。

• 前期准备：专业人员穿戴防护装备，携带专业检测设备进入细胞房，对空气、台面、仪器设备表面、培养箱内部等各个区域进行采样，确定污染微生物的种类和分布范围，将细胞房内的重要物品、细胞培养物等妥善封存或转移至安全区域。

• 污染清除：针对已确定的污染区域和物品，使用相应的高效清除剂进行处理，对于培养箱、显微镜等仪器设备，在确保安全的前提下，采用局部熏蒸或擦拭的方式深度杀菌，对于通风系统的管道、滤网等部位，使用专业的喷雾设备进行处理。

• 收尾工作：完成消杀和清洁工作后，再次对细胞房全面检测，确保污染已被彻底清除，各项指标达到正常标准，同时对细胞房通风换气，消除残留的消毒剂气味。

• 专业团队：拥有经验丰富、经过专业培训的技术人员，熟悉细胞房的环境和操作规范，能够准确判断污染情况并实施有效的消杀措施。

• 优质产品：采用先进的数字化过氧化氢消毒设备与食品级高效消毒剂、抗真菌剂等，既能保证彻底杀灭微生物，又不会对细胞房内的设备、仪器以及后续的细胞培养实验造成不良影响。

• 个性化服务：根据每个细胞房的实际布局、使用情况和污染程度，制定个性化的消杀方案，针对性地解决污染问题。

• 高效安全：能实现对黑色枯草芽孢杆菌 6 个 log 的杀灭效果，2-3 个小时即可完成整个灭菌过程，不影响第二天正常使用，残留验证资料充分，腐蚀性极低，对人体安全3。

• 响应及时：主要一二线城市可 24 小时上门消毒服务。

如果需要相关服务，可联系克微生物李工：17391794799（微信同号）。