梅毒实验室诊断方法-血清学检测法

非梅毒螺旋体抗原血清试验

非梅毒螺旋体抗原血清试验,包括性病研究实验室（VDRL）试验、快速血浆反应素（RPR）环状卡片试验、甲苯胺红不加热血清试验（TRUST）等

VDRL试验

【基来源根基理】

梅毒螺旋体感染人体后,宿主会发生抗类脂抗原的抗体（反应素）,与一定比例的心磷脂、卵磷脂及胆固醇混合物抗原反应,可检测梅毒患者血中的抗类脂抗原的抗体

【仪器资料】

1. 梅毒水平旋转仪、显微镜

2. 试剂盒：VDRL抗原原液、VDRL缓冲液、抗原滴管及针头、带直径14mm漆圈的玻璃反应板、VDRL试验结果参照图片

3. 30mL平底玻璃小瓶、生理盐水

【标本收集】

1.血清：抽取静脉血,室温静止凝固后,分离新鲜血清.也可采纳冻存的血清.

2.脑脊液：采纳腰椎穿刺术获得,应由相关专业人员把持.

【操作步骤】

1.VDRL抗原配制

2.VDRL玻片定性试验

（1）灭活：血清标本56℃灭活30分钟.

（2）吸样：吸取0.05mL血清放入反应板圈中,将血清涂布到整个圈内.

（3）加抗原：用标准针头加入1滴抗原.

（4）反应：将反应板置梅毒水平旋转仪上旋转4分钟,〔(180±2)次/分钟〕,立即置低倍显微镜下观察

（1）加稀释液：在圈加入0.05mL生理盐水（根据需要确定稀释度）.

（2）样本稀释：吸取0.05mL样本与各圈中盐水作系列稀释并涂布整个圈内.

（3）以下步伐同定性试验（2）~（4）

【结果判读】

凝集反应强度分级：

3＋~4＋：年夜的或中等年夜小的絮状物,液体清亮

2＋：絮状物较小,液体较清亮

1＋：絮状物较小,均匀分布,液体混浊

±：抗原复合物颗粒稍粗

－：抗原颗粒均匀、细小

【结果陈说】

1．定性试验：

（1）阳性：镜下可见1＋~4＋的絮状凝集物.

（2）阴性：不发生凝集反应.

2．定量试验：

滴度：镜下可见絮状凝集物的血清最高稀释倍数.

【临床意义】

对一期、二期、潜伏期和晚期梅毒患者的敏感性分别为78%、100%、96%和71%.脑脊液VDRL阳性对神经梅毒有诊断意义.

【注意事项】

1．VDRL用抗原需当天配制.

2．试验反应完毕,应立即观察结果.

RPR试验

【基来源根基理】

RPR试验是VDRL试验的一种改良方法.该法在心磷脂、卵磷脂和胆固醇等组成的抗原中加入活性炭颗粒,与待检血清（浆）中的反应素结合,形成肉眼可见的黑色絮状物.

【仪器资料】

1．水平旋转仪.

2．RPR试剂盒：RPR抗原、直径为18mm圆圈的反应卡片、抗原滴管、针头.

【标本收集】

1．血清：抽取静脉血,室温静止凝固后,分离新鲜血清.也可采纳冻存的血清.

2．血浆：各种抗凝剂制备的血浆.

【操作步骤】

1．定性试验

（1） 加样：吸取0.05mL血清(浆)放在卡片圈中,并均匀地涂布在整个圈内.

（2）加抗原：将抗原轻轻摇匀,用9号针头[每毫升（60±1）滴]加1滴抗原.

（3）反应：将卡片置梅毒水平旋转仪旋转8分钟[（100±2）转/分钟].立即在亮光下观察结果

2．定量试验

（1）稀释液准备：在圈内加入0.05mL生理盐水（根据需要确定稀释度）,勿将盐水涂开.

（2）加样：吸取0.05mL血清（浆）与各圈中盐水作系列稀释,并涂布整个圈内.

（3）同定性试验（2）~（4）.

【结果判读】

凝集反应强度分级：

3＋~4＋：圆圈内呈现中到年夜的黑色絮状物,液体清亮

2＋：圆圈内呈现小到中的黑色絮状物,液体较清亮

1＋：圆圈内呈现小的黑色絮状物,液体混浊

－：圆圈内仅见碳颗粒集于中央一点或均匀分散

【结果陈说】

1．定性试验：

（1）阳性：呈现1＋~4＋强度的凝集反应.

（2）阴性：不发生凝集反应.

2．定量试验：

滴度：呈现凝集反应的血清最高稀释倍数.

【临床意义】

1．RPR试验适用于梅毒筛查、疗效观察、复发或再感染的检查.

2．对未经治疗的一期、二期和潜伏梅毒患者的敏感性分别为86%、100%和98%.

【注意事项】

试验应在23～29℃环境中进行

TRUST试验

TRUST试验是用甲苯胺红颗粒取代RPR试验中的碳颗粒作为指示物,所以阳性结果为红色絮状物.其基来源根基理、仪器资料、标本收集、把持步伐、结果判读、结果陈说、临床意义及注意事项等与RPR试验基本相同