Nat Neuro丨杨辉团队利用AAV递送RNA编辑工具，治疗MECP2重复综合征

MECP2重复综合征(MECP2 Duplication Syndrome,MDS) 是一种罕见且致命的X连锁神经发育障碍性疾病，由X染色体上MECP2基因重复导致的MeCP2蛋白过表达引起。MeCP2是一种关键的表观遗传调控因子，在正常脑发育和功能维持中发挥重要作用。主要症状包括婴儿期肌张力低下、严重智力障碍、发育迟缓、癫痫、反复呼吸道感染、运动技能和语言能力丧失、焦虑及寿命缩短。MDS主要影响男性患者，全球约有5万病例，其中约50%的患者在25岁前因并发症去世。目前尚无针对MDS疾病的获批疗法，现有治疗仅限于对症管理和支持性护理。

2024年12月12日，辉大基因/中国科学院上海药物所杨辉团队及临港实验室胥春龙在Nature Neuroscience发表题为An RNA editing strategy rescues gene duplication in a mouse model of MECP2 duplication syndrome and nonhuman primates的研究论文。该研究通过单次侧脑室注射方式，使用单个腺相关病毒 (AAV)载体递送辉大基因专有的高保真、高活性的RNA编辑工具hfCas13Y及MECP2基因的引导RNA (gRNA)，在MDS小鼠模型和野生食蟹猴模型中实现了大脑内hfCas13Y和MECP2 gRNA的稳定、持久表达。同时大脑MECP2基因的表达被敲低至生理性可接受的水平，显著改善了人源化MDS小鼠的运动功能、焦虑抑郁样行为、学习和记忆能力、社交功能，并延长了生存时间。这一研究为后续临床试验提供了坚实的科学基础。目前，临床试验已正式启动（NCT06615206）。

本研究旨在筛选高效且特异的RNA编辑工具和gRNA以高效敲低MECP2。研究人员基于辉大基因自主研发的AI驱动 HG-PRECISE®平台，通过体外细胞实验中筛选出高保真、高活性的RNA编辑工具——hfCas13Y。随后，在细胞系中针对人、猴、小鼠MECP2 mRNA的保守同源区域筛选出的gRNA，该gRNA可将MECP2 mRNA水平降低至90%以上，且未观察到明显的脱靶效应。为评估hfCas13Y-gMECP2对携带人源MECP2基因的MDS转基因小鼠模型 （下称MDS小鼠）【1】的治疗效果，研究人员将hfCas13Y-gMECP2装载到单个AAV载体中，并通过侧脑室注射，将不同剂量的AAV递送到新生的雄性MDS小鼠脑内。给药4周后，MDS小鼠大脑皮层、纹状体和海马组织中的MECP2 mRNA和蛋白水平均显著敲低。最高剂量下AAV将MECP2表达水平敲低至接近野生小鼠水平。免疫荧光染色和单细胞RNA测序结果进一步显示，在单个神经元水平上，最高剂量的AAV将大脑皮层中的MECP2表达敲低至野生小鼠Mecp2表达水平的35-75%，达到有效治疗MDS且避免引发Rett综合征 (RTT) 的最佳范围【2】。大脑皮层的RNA测序结果表明，给药4周和48周后，MDS小鼠大脑皮层中异常基因表达模式恢复至与野生小鼠相似。

行为学评估显示，注射AAV 8周后，MDS小鼠的运动功能、焦虑抑郁样行为、社交行为及学习和记忆能力恢复至野生小鼠水平，并持续至26周。最高剂量下治疗后的MDS小鼠的生存时间显著延长。长期安全性评估证实，该剂量在MDS小鼠中未表现出安全性风险。此外， AAV-hfCas13Y-gMECP2在成年MDS小鼠中也表现出显著的疗效。

最后为了验证AAV-hfCas13Y-gMECP2在降低食蟹猴大脑中MECP2表达水平的有效性，研究人员通过侧脑室注射的方式，将不同剂量的AAV-hfCas13Y-gMECP2递送到成年雄性食蟹猴大脑中。注射6-8周后，结果显示hfCas13Y在整个大脑中广泛分布，并呈现剂量依赖性。同时，不同剂量组的食蟹猴大脑中MECP2 mRNA的平均表达水平显示出下降低趋势，尤其在高剂量AAV给药组中，野生食蟹猴大脑内的MECP2 mRNA和蛋白表达均显著下降。以上结果表明，AAV-hfCas13Y-gMECP2能够有效降低非人灵长类动物大脑内的MECP2水平。

此外，研究还检测了与MECP2下游调控相关的分子GDF11在高剂量AAV治疗后的变化。GDF11是一种潜在的MDS疾病生物标记物【3】，在MDS中其表达水平升高，而在RTT中则降低。在本研究中，研究人员检测量了食蟹猴脑脊液中GDF11蛋白含量，发现高剂量AAV给药后，不同时间点脑脊液中GDF11蛋白水平均有所降低。这进一步支持了AAV-hfCas13Y-gMECP2在调节与MECP2相关的分子通路方面的潜力，并为其治疗MDS提供了更为广泛的机制基础。

该研究由辉大基因/中科院上海药物所杨辉团队共同完成。辉大基因研发中心杨栋博士、吴晓晴、段梦思，中科院上海药物所博士后姚依楠博士为本文的共同第一作者，杨辉研究员、临港实验室胥春龙研究员、辉大基因施霖宇博士、姚璇博士为本文的共同通讯作者。

根据临床前的有效性和安全性数据，辉大基因在北京大学第一医院开启了英雄HERO（first-in-Human trial toEvaluate a novel CRISPRRNA-editing therapy, HG204, in patients with MDS, a rareOrphan disease） 临床试验。目前，已完成了首例受试者给药，标志着全球首个针对MDS的RNA编辑疗法的临床评估正式启动。这一进展是MDS这一罕见且严重神经发育障碍领域的重大突破。

此外，HG204已获得美国食品药品监督管理局 （FDA） 授予的孤儿药 （ODD） 和罕见儿科疾病 （RPDD） 认定，以及欧洲药品管理局 （EMA） 颁发的ODD认定，进一步凸显了其在满足未被满足的临床需求中的重要意义。

https://www.nature.com/articles/s41593-024-01838-6

上海药物所基因治疗中心招收博后，方向包括AI介导的基因编辑工具开发和罕见疾病的基因治疗，欢迎投递简历。

制版人：十一

参考文献

1 Heckman, L. D., Chahrour, M. H. & Zoghbi, H. Y. Rett-causing mutations reveal two domains critical for MeCP2 function and for toxicity in MECP2 duplication syndrome mice.eLife3 (2014). https://doi.org:10.7554/eLife.02676

2 Chao, H. T. & Zoghbi, H. Y. MeCP2: only 100% will do.Nat Neurosci15, 176-177 (2012). https://doi.org:10.1038/nn.3027

3 Bajikar, S. S. et al. MeCP2 regulates Gdf11, a dosage-sensitive gene critical for neurological function.eLife12 (2023). https://doi.org:10.7554/eLife.83806

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