洁净区环境监测：悬浮粒子、浮游菌检测点位及频率 北京中邦兴业

许多行业（如制药、生物技术、食品等）对生产环境的洁净度有严格的法规要求。通过动态监测，可以实时或定期了解洁净区的空气洁净度、悬浮粒子浓度、微生物数量等关键指标，确保它们符合既定的标准或规范要求，可以确保洁净区环境符合相关法规和标准的要求，避免合规风险。

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动态监测的方法和注意点

1、 悬浮粒子
目前，悬浮粒子的测定方法主要有显微镜法和自动粒子计数法两种，而用于洁净区空气悬浮粒子监测的仪器多为光散射粒子计数器和激光粒子计数器。

综合实际情况，建议在A 级区内采用连续监测系统检测空气悬浮粒子。在线监测系统可以实时反馈监测信息，以便监控人员及时提出解决其中存在问题的方法。比如，提醒操作人员减缓动作幅度，为环境清洁、消毒、停机等待等生产过程控制提供依据。与此同时，还要为空调过滤器的日常检查、维护建立一套完善的操作、检测、更换程序。只有这样做，才能有效地控制其中存在的风险。

【在线悬浮粒子监测】

2、 浮游菌
经常使用撞击法中的狭缝式采样器监测浮游菌采样器，通过多孔盖抽取空气，而气流中的微生物则撞击附着在标准培养皿中琼脂培养基的表面。通常情况下，在测定浮游菌时，每个采样点的取样量不得少于1m3，而在生产过程中，可以设定采样器，利用采样、等待、再采样的间隙方式监测生产全过程。另外，浮游菌采样器还有筛孔撞击式、表面真空取样、离心式、过滤式和液体冲击式等采样方式。

沉降菌是用暴露法收集降落在培养皿中的活生物性粒子，并将其培养、繁殖后加以计数所得。沉降菌测定的培养皿应布置在有代表性的地方和气流扰动最小的地方。具体的采样方法和培养方法是，将培养皿放置在接近于操作高度的位置后，打开外盖并倒扣放置，使培养基表面暴露出来。在静态监测时，培养皿应放置不少于30min 后再将外盖盖上收集；在动态监测时，暴露时间应根据沉降碟本身和环境两方面因素验证所得，单个沉降碟的暴露时间可以少于4h，但是，不得超过4h。在同一位置，可以使用多个沉降碟连续监测并累积计数，然后收集，酵母菌和霉菌通常在20～25 ℃的条件下培养5～7d后计数，而需氧菌通常在30～35 ℃的条件下培养48～72h 后计数。沉降碟以其价廉、轻便、对空气环境破坏较小等优点被广泛应用于洁净区环境检测中。

但是，在使用沉降碟时，应先确认沉降碟的暴露时间（记下平皿打开和结束的时间），以保证暴露后的培养基不会因失水等原因而影响微生物的正常生长。目前，好多厂家的培养皿是本厂自配的，密封性没有购买的培养皿强，在生产过程中，转运会对培养皿本身造成污染，使所得的结果出现假阳性。所以，建议在生产过程中，应使用培养皿本身的空白对照或购买密封性好的培养皿，以提高检测结果的可信度。
4、物体表面微生物测试
物体表面微生物测试可以确定物体（包括工作服）表面微生物的污染程度。一般情况下，可以使用棉签间接取样后培养、直接接触法取样和表面冲洗法3种方法，而利用直接接触法时，所用的接触碟要放置至室温后使用。
4.1棉签擦拭表面取样方法
棉签擦拭表面取样方法的取样面积一般为25cm2，人体表面擦拭至少应包括双手手指印、头、口罩、肩部、前臂、手腕和腿等。棉签间接取样适用于不规则表面，取样时，手握住拭子柄，以30°角与取样表面接触，采用S 型或Z 型缓慢并旋转棉签充分擦拭。如果拭子头为藻酸钙材料，则要用稀盐酸溶液作为稀释剂（比如质量分数为1%的柠檬酸钠溶液），这样才能让拭子头完全溶解。

4.2直接接触法
直接接触法是将接触碟直接接触需采样的物体表面，接触时间一般在10s左右，培养后便会长出菌落。因为该方法容易操作而且可以定量，所以被广泛使用。但是，这个测试只适用于平整光滑的表面，通常在灌封或灌装后清场前取样。取样后，需用蘸有质量分数为75%的乙醇的纱布擦拭被取样表面，以除去残留。将取样后并做好标记的接触碟置于培养箱中培养，培养箱的参数一般设定在30～35 ℃，培养72h后计数。

4.3表面冲洗法
表面冲洗法适用于监测大面积区域内表面的微生物含菌量，包括设备轨道、储水罐等。用定量的无菌水冲洗表面，收集淋洗水，用膜过滤法计算微生物的数量。
5、风速测试检测
生产过程中A 级区的风速，使生产环境的风速符合指导值（0.36～0.54 m/s），同时，还可以判断层流是否开启、是否正常运行、是否被堵或泄漏，使生产环境达到要求。目前，由于安装的隔离器密闭性良好，所以，经过相应的验证，也可以适当地降低层流风速。部分文献指出，A 级区可以选择正压无菌紊流的流型，不一定都要选择层流流型。