动物模型与评估丨啮齿动物眶下神经慢性缩窄术模型

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眶下神经慢性缩窄术模型（Chronic Constriction Injury of the Infraorbital Nerve, ION-CCI）通过对小鼠眶下神经进行慢性缩窄操作，使神经受到持续的压迫和损伤，从而模拟临床中常见的神经受压导致的神经病理性疼痛情况。通过结扎眶下神经，模拟三叉神经受压引起的痛觉敏化。神经受到压迫后，会引发一系列病理生理变化，包括神经纤维的脱髓鞘、轴突损伤、炎症反应激活以及神经传导功能障碍等，最终导致小鼠出现疼痛相关的行为学改变，如面部对机械刺激和热刺激的敏感性增加等。操作简单，痛敏维持时间长，适用于研究面部疼痛。

小鼠眶下神经慢性缩窄术模型：

通常选用成年健康小鼠，常用的品系如C57BL/6等，体重一般在20 - 30g左右。小鼠在术前需要在清洁、安静、温度适宜的环境中饲养一段时间，以适应环境并保证其生理状态稳定。采用合适的麻醉剂对小鼠进行麻醉，待小鼠进入麻醉状态后进行手术操作。

切口暴露：在小鼠一侧面部做一个切口，通常从眼外眦下方开始，沿着眼眶下缘向口角方向延伸，长度约为1-1.5cm。切开皮肤后，小心分离皮下组织和肌肉，暴露眶下神经。

神经缩窄：找到眶下神经后，用4-0或5-0的铬制羊肠线或丝线在神经干上间隔一定距离进行松散结扎，一般结扎3-4处，结扎力度以能看到神经轻微变形但不阻断神经血供为宜。结扎过程中要注意避免损伤神经周围的血管和组织。

缝合伤口：完成神经结扎后，用生理盐水冲洗手术区域，然后将切开的皮肤和肌肉分层缝合，确保伤口闭合良好，防止感染和出血。

大鼠眶下神经慢性缩窄术模型：

每只大鼠准备两根大约6厘米长的铬肠线结扎线（5-0号），并将它们放入无菌生理盐水中以防止干燥、变硬和脆弱。使用戊巴比妥钠麻醉动物，通过伸展一条腿并用指甲掐趾蹼之间的皮肤来监测麻醉水平，确保施加了适当的压力，动物不会屈曲其肢体。剃除大鼠的头部毛发，以便进行大约25毫米的中线头皮切口，前后与眼睛中心等距离。将大鼠的头部固定在立体定位架中或以其他方式固定。将大鼠放在加热垫上以保持体温。在大鼠的双眼上涂抹眼科软膏，以防止因干燥而受损。用酒精和碘伏擦拭剃毛的头部区域。进行中线头皮切口，暴露头骨和鼻骨。使用棉签和杜蒙钳将眼眶边缘（由上颌骨、额骨、泪骨和颧骨形成）分离。使用棉签吸收可能出血的血液。为了接触IoN（眶下神经），轻轻用精密棉签推开眼眶内容物，注意不要过度拉伸穿过IoN上方的前筛神经。使用精密棉签和杜蒙钳将IoN从周围结缔组织中分离，使用棉签吸收可能出血的血液。进行结扎时，将一根铬肠线的一端沿额骨向下推，内侧至IoN，并在IoN平行且下方几毫米处推进。现在结扎线被固定在IoN和额骨之间。将45度角的杜蒙钳的尖端滑到IoN下方，使其靠近结扎线。轻轻将IoN向侧面拉开以露出结扎线和钳子的尖端。用钳子夹住结扎线，从IoN下方横向拉出。将结扎线从眼眶腔中拉出，直到结扎线的两端与IoN大致等距离。用结扎线的两端做一个“滑结”，以完美控制收缩程度，并将结扎线滑到IoN上。将结扎线进一步滑到IoN上，使其直径略微减小。在滑结上打一个常规结，以保持收缩程度不变（即防止滑结滑落）。剪断结扎线，留下约2毫米的自由端。使用聚酯缝线（4-0）缝合头皮切口，并让大鼠在加热垫上恢复。在大鼠恢复足够的意识以保持胸卧位并且不要在完全恢复之前将动物返回其他动物的陪伴。

自发行为观察：

观察小鼠在自由活动状态下的自发行为，如频繁搔抓面部、面部摩擦物体、饮食减少、活动减少等，通过对这些自发行为的发生频率和持续时间进行记录和分析，评估小鼠的自发痛程度和生活质量变化。

Fig1 在IoN-CCI模型中，孤立面部梳理行为的变化

孤立面部梳理的时间（A）和孤立面部梳理的次数（B）

在术后第18天和第21天，与术前相比，假手术小鼠的孤立面部梳理时间有显著增加。而在CCI小鼠中，与术前相比，术后第7天孤立面部梳理时间显著增加，特别是在使用丝线结扎的小鼠中，这种增加比使用肠线结扎的小鼠更为明显。在丝线结扎的小鼠中，孤立面部梳理时间在术后第21天仍在增加，而在肠线结扎的小鼠中，孤立面部梳理时间在术后第14天有所下降，但与术前相比仍然显著增加。然而，在整个研究期间，假手术小鼠和CCI小鼠之间并没有显著差异。这表明丝线结扎比肠线结扎在术后引起了更强的反应。

IoN-CCI模型可以引起小鼠的神经病理性疼痛行为，如孤立面部梳理行为的增加，这是评估神经病理性疼痛治疗效果的一个重要指标。通过这种行为测试可以评估潜在镇痛药物或治疗策略的效果。

机械刺激阈值测定：

可使用Von Frey纤维丝进行检测。将小鼠放置在一个透明的有机玻璃箱内，待其适应环境后，用不同弯曲力的Von Frey纤维丝垂直刺激小鼠面部眶下神经分布区域，逐渐增加刺激力度，直到小鼠出现明显的头部退缩、搔抓面部等疼痛反应行为，记录此时的刺激力度作为机械刺激阈值。通过比较术前和术后不同时间点的机械刺激阈值变化，评估小鼠的疼痛程度和神经敏感性变化。

热刺激阈值测定：

常用热辐射法进行检测，将小鼠固定在一个特制的装置上，使其面部暴露在热辐射源下，热辐射源对准眶下神经分布区域。记录小鼠从接受热刺激到出现头部退缩、甩头或舔面部等疼痛反应行为的时间，即热刺激潜伏期。术后热刺激潜伏期的缩短表明小鼠对热刺激的敏感性增加，存在神经病理性疼痛。

文献引用：

• Deseure K, Hans GH. Chronic Constriction Injury of the Rat's Infraorbital Nerve (IoN-CCI) to Study Trigeminal Neuropathic Pain. J Vis Exp. 2015 Sep 21;(103):53167.

• Inoue, K., Tsuda, M. Microglia in neuropathic pain: cellular and molecular mechanisms and therapeutic potential. Nat Rev Neurosci 19, 138–152 (2018).

• Zhang WJ, Zhu ZM, Liu ZX. The role and pharmacological properties of the P2X7 receptor in neuropathic pain. Brain Res Bull. 2020 Feb;155:19-28.

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