斑马鱼行为篇（81）：斑马鱼肠道出血模型

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斑马鱼肠道出血模型通常用于研究消化道出血的原因及治疗方案。消化道出血可以是上消化道或下消化道出血，可能由多种原因引起，包括但不限于溃疡、炎症、肿瘤或其他消化道疾病。在研究中，斑马鱼作为一种模式生物，可以帮助更好地理解消化道出血的病理生理过程。通过建立斑马鱼肠道出血模型，可以评估不同药物对肠道出血的治疗效果。斑马鱼模型可以用于评估药物的毒性和副作用。由于斑马鱼胚胎透明，可以在不损伤胚胎的前提下清晰地观察药物对胚胎发育的影响，从而评估药物的安全性。通过研究斑马鱼肠道出血模型，可以探索不同药物对肠道出血病理过程的影响，从而为药物筛选和治疗提供科学依据。

模型建立：

建立斑马鱼肠道出血模型的方法有几种，其中一种常见的方式是通过化学诱导法。例如，可以使用某些化学物质来诱导斑马鱼产生消化道损伤，进而导致出血现象。常用的化学诱导剂之一是Metamizole（安痛定），它能引起斑马鱼消化道黏膜损伤，导致出血。

化学物质诱导：可以使用化学物质如葡聚糖硫酸钠（DSS）来诱导斑马鱼肠道出血。DSS可以破坏肠道上皮细胞间的紧密连接，导致肠道炎症和出血。在实验中，将DSS加入到斑马鱼的养殖水中，通过观察斑马鱼的行为和肠道组织学变化来评估出血情况。

基因编辑技术：通过CRISPR/Cas9等基因编辑技术敲除或敲入特定的基因，可以模拟人类遗传性疾病导致的肠道出血。例如，通过敲除与血小板功能相关的基因，可以建立血小板减少并发肠道出血的模型。

实验步骤：

将180尾斑马鱼分为6组，即正常组及辛伐他汀组（浓度分别为1、2、4、6、8μmol/L），3mL/孔，置于六孔板中（30尾/孔）24h。用邻联茴香胺染色后，在解剖显微镜下观察和记录每组肠道出血的斑马鱼数量，以出血发生率评价模型是否成功。出血发生率（%）＝肠道出血的斑马鱼数量/斑马鱼总数×100%。

分组及给药将180尾野生型AB品系斑马鱼或血小板荧光斑马鱼Tg（用于止血效果检测）按随机数字表法分为正常组，模型组，给药组，3mL/孔，置于六孔板中（30尾/孔）。造模成功后，加入相应药液，24h后检测指标。在建立的模型上，可以进行药物干预研究，评估不同药物对肠道出血的治疗效果。

指标检测：

建立模型后，可以通过多种方法来评估肠道出血的情况，包括观察斑马鱼的行为变化、使用染料如邻联茴香胺染色来观察出血情况，以及通过组织学切片和免疫组化染色来评估肠道组织的损伤程度。在实验过程中，可观察斑马鱼肠道是否有出血点，并记录出血的程度和位置。有助于评估不同药物或治疗方法对消化道出血的疗效。此外，通过基因敲除或过表达等遗传操作手段，也可以进一步探究特定基因在消化道出血中的作用。止血效果每组任意选取10尾血小板荧光斑马鱼Tg。在荧光显微镜下，观察肠道内血小板聚集情况。

注意事项：

在进行斑马鱼肠道出血模型的实验时，需要注意斑马鱼的饲养条件、实验操作的标准化以及结果的可重复性。

参考文献：

• Tărniceriu CC, Hurjui LL, Florea ID, Hurjui I, Gradinaru I, Tanase DM, Delianu C, Haisan A, Lozneanu L. Immune Thrombocytopenic Purpura as a Hemorrhagic Versus Thrombotic Disease: An Updated Insight into Pathophysiological Mechanisms. Medicina (Kaunas). 2022 Feb 1;58(2):211.

• 王珺,郎海燕,周佳丽,等.加味四君子汤通过影响5-羟色胺及其受体对斑马鱼肠道出血模型的止血效应及其机制探讨[J].北京中医药大学学报,2024,47(04):516-522.

• Kiran NS, Yashaswini C, Chatterjee A. Zebrafish: A trending model for gut-brain axis investigation. Aquat Toxicol. 2024 May;270:106902.

• Willms RJ, Jones LO, Hocking JC, Foley E. A cell atlas of microbe-responsive processes in the zebrafish intestine. Cell Rep. 2022 Feb 1;38(5):110311.

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