一例APTT混合纠正试验引起的思考

作者|李敬红

单位|昆明市延安医院

前言

混合纠正试验是我们在做凝血常规检测中遇到一些原因不明的凝血时间延长，为了探明其延长原因而做的一个试验。即是初步判断延长的血浆凝固时间是由于缺乏凝血因子还是存在凝血抑制物所致，指导进一步确诊凝血试验的选择［1-4］。

实际工作中由于APTT相对来说受影响因素更多，所以对APTT的纠正混合试验应用的更多一些。当APTT不明原因延长超过正常对照5S以上，患者有相关症状、体征或临床医生有需求进一步了解延长的原因，即可进行混合纠正实验。

案例经过

患者：女，62岁 ，外院检查显示APTT延长，PLT升高4年

现病史：4年前查血常规：WBC 6.25，HGB 130，PLT 417。凝血：PT 10.7，APTT 45.6，Fib 3.73 。未诊治，后续体检检测血常规PLT稳定中呈下降趋势，末次2023.10 PLT 393×109/L。

既往史：糖尿病，甲状腺结节。

2024.6.11我院血液门诊申请开单复查PLT结果、混合纠正试验及内源性凝血因子检测，我院检测结果如下：

血常规结果：

表1

混合纠正实验结果（1）：

表2

内源性凝血因子检测结果：

表3

混合纠正实验结果（2）：

表4

狼疮抗凝物检测结果：

表5

混合纠正实验结果（1）得出Rosner：1.5，根据专家共识RI值<10%提示为凝血因子缺乏，但是凝血因子检测的结果显示为不存在凝血因子缺乏，两个结果互相矛盾。

查找原因后怀疑是NPP的值偏高导致，因此重新配制新鲜的混合血浆，再次检测混合纠正试验得出结果（2）并加做了狼疮抗凝物组合，该结果的RI=13.7%处于灰区，△=0.3<3s为不存在时间和温度依赖性抑制物且加做狼疮抗凝物为阳性。

案例分析

本案例中患者APTT单独延长，我们都知道APTT延长的原因有①服用抗凝药②凝血因子缺乏③存在狼疮抗凝物④存在因子抑制物等几种原因，但是患者并未服用抗凝药，内源性凝血因子检测显示凝血因子都正常，显然前两种原因都不是，做了第一次混合纠正试验，结果与因子结果相矛盾，无法解释该结果；

检查了所有环节，虽然正常血浆的值也在正常范围，但存放时间接近了两周的限期，考虑是正常混合血浆放置时间过长导致凝血因子、抗凝物质活性减低所致，所以重新制备了新的正常混合血浆，再次进行了混合纠正试验并加做了狼疮抗凝物检测，结果如表4、表5，显示该患者存在狼疮抗凝物干扰，导致APTT检测延长。

总结

混合纠正试验是为了找到不明原因凝血时间延长的试验方法，不同的结果，反映出相反的治疗方向，能纠正则是凝血因子缺乏，有出血风险，不能纠正且存在非时间温度依赖性则为狼疮抗凝物存在，有血栓风险，如果有时间和温度依赖性则存在因子抑制物。因此在做混合纠正试验时要注意每一个可能影响结果的细节及步骤。

结合该病例，自制新鲜正常混合血浆时选择的血浆应符合以下条件：

1.选择至少20份（男女比例1︰1）常规凝血试验均正常的血浆(无溶血、凝块、黄疸和脂血等)混合制备（理想凝血因子水平应在80%~120%之 间）。

2.避免选择感染、肿瘤、创伤、术后、妊娠、新生儿、肝炎、自身免疫性疾病等人群标本。

3.所有单个血浆标本的血小板计数应<10×109 /L、不含LA［5]。

4.等体积混合，再次离心后分装冻存（-20℃），应放置于非自动除霜冰箱［6］，-20℃条件下仅能放置2周。使用时将冻存管取出后在37℃水浴中 约5-10 min或放置室温至完全融化，并轻轻颠倒混匀后进行试验，禁止反复冻融使用。

应避免在37℃孵育时间不足或过长，否则可能会因形成冷沉淀或热失活而导致凝血因子活性的损失。复溶后应重新检测APTT，APTT需在正常参考范围内才可进行纠正试验。[7]

专家点评

点评专家：程云 昆明市延安医院检验科临检组组长 副主任医师

混合纠正实验是一项适用性很强的检测项目，它能够为我们判别患者APTT延长的原因，为临床医生提供下一步的检测方向，并对治疗起到方向性的指导作用；但由于以前没有统一的操作流程和结果解读，报告方式也很混乱，导致临床上应用的普遍性很低。随着专家共识的发布，该实验有了统一的标准化操作规范，临床应用的普遍性也得到了很大的提升。

参考文献

[1]Chen J, Phillips B, Chandler WL. Evaluation of prothrombin time and activated partial thromboplastin time mixing studies using an estimated factor correction method[J]. Blood Coagul Fibrinolysis, 2016, 27(1):90‐96. DOI: 10.1097/MBC.0000000000000375.

[2]Mohammad E, Thachil J. Mixing studies for abnormal coagulation screen‐the current trend[J]. Clin Chem Lab Med, 2017, 55(3): e54‐e55. DOI: 10.1515/cclm‐2016‐ 0595.

[3]Choi SH, Rambally S, Shen YM. Mixing Study for Evaluation of Abnormal Coagulation Testing[J]. JAMA, 2016, 316(20): 2146‐2147. DOI: 10.1001/ jama.2016.15749.

[4]尚红,王毓三,申子瑜 .全国临床检验操作规程(第 4版)[M]. 人民卫生出版社, 2015.

[5]Favaloro EJ. Coagulation mixing studies: Utility, algorithmic strategies and limitations for lupus anticoagulant testing or follow up of abnormal coagulation tests[J]. Am J Hematol, 2020, 95(1):117‐128. DOI: 10.1002/ajh.25669.

[6]Baker P, Platton S, Gibson C, et al. Guidelines on the laboratory aspects of assays used in haemostasis and thrombosis[J]. Br J Haematol, 2020, 191(3):347‐362. DOI: 10.1111/bjh.16776

[7]中国研究型医院学会血栓与止血专委会. 活化部分凝血活酶时间延长混合血浆纠正试验操作 流 程 及 结 果 解 读 中 国 专 家 共 识 [J]. 中 华 检 验 医 学 杂 志 , 2021, 44(8): 690-697.

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编辑：李玲 审校：陈雪礼