浙江
目前自噬研究的热度居高不下，成为国自然的「常客」。据统计，在 2023 年自噬研究荣登国自然中标榜第五名，项目资助总净额达 3 亿 +。面对当前的「风口」，我们又该瞄准哪些方向？
图 1. 自噬相关项目中标统计（数据来源：国家自然科学基金委）
一套完整的自噬研究思路长什么样？自噬调控、检测及其难点怎么解决？如何快速探究自噬调控中多种信号通路/因子中的关键因子？
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自噬的分类
根据底物进入溶酶体途径的不同，可将自噬分为大自噬、小自噬和分子伴侣介导的自噬（CMA）。
1）经典自噬：也称大自噬，由脂质膜结构包绕带降解物形成自噬体，然后与溶酶体融合并降解其内容物的过程。
2）小自噬：也发生相同的包绕过程，但包绕底物的是自身发生内陷的溶酶体膜。
3）CMA：是指胞质内蛋白结合到分子伴侣后被转运到溶酶体腔中并消化的过程。CMA 在清除蛋白质是有选择性，底物为可溶的蛋白分子。
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自噬检测方法和指标
检测自噬水平的方法主要有三种：电镜观察、Western Blot 检测和荧光蛋白标记检测。
1）电镜检测：观察自噬不同阶段的隔离膜，自噬小体，自噬溶酶体。
2）荧光蛋白标记检测包括单荧光质粒检测，即检测 GFP-LC3；穿梭质粒检测，即通过自噬溶酶体的酸碱度改变导致的 GFP 淬灭来观察。
3）WB 检测：LC3. ATG family，Beclin 1，ULK1 作为检测指标。其中 LC3 贯穿整个自噬过程，是目前公认的自噬标记物。
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自噬经典研究思路
好的实验思路可使研究事半功倍，经典研究思路可分为：
1）证明自噬所参与的研究表型（电镜、LC3 I/I WB、LC3 亚细胞定位、LC3 双荧光测细胞自噬流）；
2）验证自噬在表型中起到关键（使用自噬抑制剂和激动剂）；
3）寻找表型与自噬的衔接分子（检测 PI3K 通路、Beclin-1、ATG 家族各成员）；
4）证明衔接分子与自噬的相关性（说明该分子在衔接自噬和表型中的作用机制）。
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内容策划：邹礼平
内容审核：朱晓芳
题图来源：图虫创意
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