最新进展 | 非洲猪瘟的诊断技术与疫苗研发

非洲猪瘟是一种高度传染性的猪类病毒性疾病，病死率可达到100%，对家猪种群和全球猪肉产业造成毁灭性打击。 非洲猪瘟存在于非洲、欧洲、亚洲、大洋洲和美洲（加勒比地区），是全球农业产业面临的主要威胁之一。

快速可靠的诊断方法对于控制非洲猪瘟至关重要，实验室诊断方法包括红细胞吸附试验和分子检测技术。疫苗是控制和预防非洲猪瘟的最佳策略，当前全球尚无注册疫苗可用。

• 非洲猪瘟的诊断

由于家猪感染非洲猪瘟病毒的致命后果，可靠和快速的诊断方法非常重要。当疾病传播到邻国或地方农场时，临床病理诊断非常重要。养殖场兽医和官方兽医服务部门应了解疾病的情况和典型特征，以便进行实验室诊断和确诊。猪瘟可能引发与非洲猪瘟相似的临床症状和病变，甚至可能导致相似的死亡率，因此非洲猪瘟几十年来一直与猪瘟进行鉴别诊断。最近在亚洲和东欧出现的高致病性猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）也添加到了非洲猪瘟的潜在临床病理学鉴别诊断中，因为受感染的动物可表现出高发病率和死亡率、出血和淋巴耗竭。

在过去几年中，随着该疾病的迅速蔓延，非洲猪瘟的实验室诊断有了根本性的进步。几十年来，红细胞吸附试验一直是非洲猪瘟病毒（ASFV）的基本诊断技术。它用于ASFV的确诊，但需要专门的实验室进行原代细胞制备，并且需要一周以上的时间才能获得结果，通常用于参考实验室。此外，由于EP402R基因的缺失，一些ASFV分离株不能吸附红细胞，该基因编码负责吸附红细胞的 CD2v 蛋白。

ASFV 核酸分子检测具有高灵敏度和特异性，是全球应用最多，并被 WOAH 推荐。通常，核酸检测分子的方法靶向ASFV基因组中编码衣壳蛋白p72（B646L基因）的高度保守区域。实时荧光定量PCR被广泛认为是检测诊断样本中ASFV核酸的金标准，但等温扩增技术因其快速、不需要热扩增而越来越受欢迎。最近描述了新的等温扩增方法，包括环介导等温扩增（LAMP）、滚环扩增技术（RCA）和重组酶聚合酶扩增（RPA）用于 ASFV 检测。此外，通过基因编辑技术工程化的CRISPR相关蛋白是诊断非洲猪瘟的有前途的下一代工具。

检测外周血的ASFV抗体是检测和监测ASF的另一种重要方法，WOAH 推荐使用某些抗体免疫测定法。在这些诊断技术中，ELISA已被广泛应用。最近还开发了用于现场的侧向层析装置，显示出良好的灵敏度和特异性。然而，大多数患有急性临床病程的动物，即在当前大流行期间观察到了典型病程，但在血清转换发生之前死亡，使得抗体测试在许多情况下不太有用。

• 非洲猪瘟的防控措施和疫苗研发

预防是防止非洲猪瘟进入无非洲猪瘟地区或国家的最重要策略。监测家猪和野猪种群是预防非洲猪瘟的关键措施，许多国家已经实施了强有力的监测计划。将非洲猪瘟病毒引入新领土有许多潜在途径，包括动物和猪肉产品的合法和非法流动，这些动物和猪肉制品可以长距离传播，也可以通过受感染的野猪传播。一旦一个国家出现疾病，就会使用多种控制工具来根除该疾病。这些措施包括强有力的诊断、改善生物安全、消除受感染的动物以及限制动物/污染物的移动。在过去的一个世纪里，这些措施已成功地用于根除欧洲的非洲猪瘟及其在美国的传播。然而，非洲猪瘟已成为一种流行病，控制和根除措施有一定的局限性。

研究有效和安全疫苗对于非洲猪瘟的控制至关重要。疫苗接种策略不应用作控制非洲猪瘟的独立干预措施，而应在完善的规划下进行，同时对疾病和生物安全进行疫苗接种后的监测。

灭活、亚单位、mRNA、DNA或病毒载体的候选疫苗不能提供有效和可靠的保护，只有少数报告显示对ASFV攻击有一定的保护作用。只有一份报告显示，使用八种不同的ASFV抗原库中的中等毒力分离株进行攻击后，保护率为100%。

减毒疫苗策略更具有可行性，当猪免疫并在毒力菌株攻击后存活时显示出良好的保护作用。然而，人们担心潜在的毒力逆转，在临床使用疫苗之前，有必要进行深入的安全性研究。由于减毒活疫苗可以在宿主体内成功复制，因此会触发体液和细胞反应，并且不需要具有共刺激活性的佐剂来增强免疫反应的质量和强度。

从 1960年代的第一次实验开始，减毒活疫苗已显示出对同源ASFV攻击的潜在保护作用，但对异源分离株没有保护作用。然而，这些初步的疫苗接种尝试也引起了安全问题，因为一些动物不会受到保护，并且观察到具有死亡率和/或临床症状和病变。

通过缺失各种基因来减弱非洲猪瘟病毒已被广泛报道。通过删除I177L基因，开发了一种高效的减毒疫苗，在中等或更高剂量下实现消除性免疫，保护猪免受欧亚大陆流行的强毒株的侵害。该疫苗已获准在越南与另一种在多基因家族（MGF）缺失疫苗一起使用。自然减毒的ASFV分离株也显示出作为候选疫苗的潜力，显示出对同源或异源ASFV攻击的部分和/或全部保护作用。

2021年，在首次报告Georgia07样基因型II毒株三年后，基因型I ASFV在中国出现，并开始引起慢性感染、低毒力和有效传播性，与葡萄牙减毒的NH/P68和OURT88/3分离株有许多相似之处。2021 年，中国发现了基因 I 型和 II 型 AFSV 重组体，这给疫苗开发带来了新的挑战，因为一些基于基因型 II 的重组减毒疫苗对基因型 II 分离株显示出良好的保护作用，但对基因型 I/II 重组毒力菌株没有表现出良好的保护作用。

使用不合规和劣质疫苗对养猪业构成重大风险。20世纪伊比利亚半岛慢性临床病程的出现与使用失败的疫苗接种策略有关。此外，这些疫苗可以与田间分离株重新结合，产生新的菌株，这些菌株可以逃避当前的诊断技术并导致猪场的持续感染。

本文来源于《Virulence》杂志上的综述文章“Pathogenicity and virulence of African swine fever virus”。

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来源：兽药产业技术创新联盟