重磅！口服植物外泌体竟可缓解肠炎（附 1 h 提取外泌体流程）

重磅！植物外泌体可直接作为口服抗炎药物。深圳市人民医院在著名一区期刊 Journal of Nanobiotechnology 发表研究成果，从可食用的马齿苋 L 中分离并鉴定外泌体颗粒（PELEN），首次发现口服 PELENs 可有效缓解急性结肠炎。机制上，口服 PELENs 能促进常规 CD4+T 细胞重编程为双阳性 CD4+CD8+T 细胞，增强抗炎水平。研究强调了口服 PELN 作为一种新型、天然和结肠靶向药物的潜力。

植物外泌体作为一种天然成分，在医疗健康、营养补充、美容护肤、食品工业以及环境保护等方面应用广泛。但提取层面仍面临技术挑战：提取流程复杂耗时、产量/得率低、纯度低、活性难以保证。而且，由于离心的速度和时间不好把握，外泌体提取总是前功尽弃。

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一．产品优势

● 方便快速：提取过程不需要高速离心机，上样到获得外泌体仅需 1 h

● 稳定性高：无剪切力，保留外泌体的完整性和生物活性

● 纯度高：层析法纯度更高，回收率 30%，粒径均一且重复性好

二．外泌体提取操作步骤（以葡萄为例）

利用榨汁、离心、除杂、滤膜过滤和外泌取提取纯化试剂盒-柱纯法（细胞上清）获取活性葡萄外泌体。

1. 实验材料：

1.1 器材：榨汁机（九阳 Z8-V82）、离心机、外泌取提取纯化试剂盒-柱纯法（细胞上清）-UR52172、100 KD 超滤柱

1.2 试剂：84、0.5 mol/L NaOH 溶液、0.9% NaCl 溶液

1.3 原材料：品种：克伦生无籽红提 产地：山东

2. 操作步骤：

☞2.1 原料清洗及消毒

① 原材料超声波清洗；

② 84 消毒液按瓜果蔬菜推荐稀释比 1:29 用纯化水进行稀释，配置消毒液浸泡葡萄 20 min；

③ 浸泡至纯化水中；

④ 将葡萄去蒂，并以纯化水清洗，至表面无滑腻感，实际清洗 4 遍；

☞2.2 原料榨汁

① 将葡萄放入榨汁机（九阳 Z8-V82），50 转/min 榨汁；

② 榨汁约 20 min，收集果汁。

汁渣分离式榨汁

☞2.3 两步离心除杂（低速、高速）

① 4 ℃ 5,000 rpm/min，离心 20 min，收集离心后上清；

离心前

离心后

② 4 ℃ 10,000 rpm/min 离心 30 min，收集离心后上清。

离心前

离心后

☞2.4 滤膜过滤

0.45 μm 滤膜过滤，收集滤液。

☞2.5 pH 调至中性后高速离心

① 原葡萄汁 pH 在 3～4，呈酸性，使用 NaOH 将 pH 调至中性 7.01，汁液由不澄清的淡红色变至半澄清的淡黄色，并出现絮状沉淀（本次为测试使用，后续将使用碳酸氢钠和柠檬酸进行 pH 调节）；

pH 调至中性后

② 4 ℃ 10,000 rpm/min 离心 20 min，收集离心后上清。

☞2.6 滤膜过滤

① 0.45 μm 滤膜过滤；

② 0.22 μm 滤膜过滤。

过滤膜后

☞2.7 外泌体提取

使用外泌取提纯化试剂盒-柱纯法（细胞上清）。

① 按说明书要求提前准备好提取柱；

② 过柱：将经 0.45 μm 或 0.22 μm 过滤器过滤后的葡萄汁液沿柱子内壁缓慢多次加入提取柱中，待葡萄汁液自然流尽；

③ 平衡：葡萄汁液流尽后沿柱子内壁缓慢多次加入15 mL Solution B 溶液，待 Solution B 溶液自然流尽；

④ 洗杂：Solution B 溶液流尽后沿柱子内壁缓慢加入 0.8 mL Solution C 溶液，待 Solution C 溶液自然流尽；

⑤ 洗脱：待上步骤中 Solution C 溶液流尽后沿柱子内壁再次缓慢加入 1 mL Solution C 溶液，收集该流穿液（该流穿液中富含外泌体颗粒）；

⑥ 浓缩：用 100 KD 超滤柱将流穿液适当浓缩；

⑦ 纯化外泌体：将收获的外泌体颗粒粗品转入 Exosome Purification Filter（EPF 柱）上室中， 4 ℃ 6,200 rpm 离心 10 min，离心后收集 EPF 柱管底的液体，此液体即为纯化后的外泌体颗粒

浓缩纯化后的成品

☞2.8 分装、送检及保存

① 取样品送检；

② 其余分装后 -80 ℃ 封口保存。

三．纯度检测与鉴定：

☞ 3.1 BCA

☞3.2 NTA

☞3.3 TEM

按照以上步骤，通过阴离子交换色谱法原理，填料与被分离样本中带负电荷的外泌体相结合，可以更好适用于植物、细胞培养上清液、尿液等样本中的外泌体提取纯化。

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内容策划：王丹琦

内容审核：吴军

题图来源：自己做的

参考文献：

[1]. Zhu MZ, Xu HM, Liang YJ, et al. Edible exosome-like nanoparticles from portulaca oleracea L mitigate DSS-induced colitis via facilitating double-positive CD4+CD8+T cells expansion. J Nanobiotechnology. 2023 Aug 31;21(1):309. doi: 10.1186/s12951-023-02065-0.