养了一年神经细胞，却有五年经验，全靠卷出来的？

在实验室里，我和师妹是公认的「闯祸搭子」，一起毛手毛脚、一起算错配比、一起污染细胞房……一起挨骂。这次我俩又同时研究起了神经干细胞的课题，但凡有师妹在，我一点都不害怕被卷到

一开始我俩都在起跑线摔倒，养个细胞也磕磕绊绊，但紧接着剧情脱离掌控，当我还在为细胞存活率低而烦恼时，小师妹已经可以自如的控制干细胞分化方向了？！这根本不像一个「工龄」只有一年的细胞培养小白，而是有多年经验的「老师傅」！

连续蹲了小师妹一周，终于让我发现了她逆袭的秘密武器——神经细胞培养指南，每次实验前她都要翻几遍！手册我也讨来了，谁看完都得说一声「真香」~

图 1. 手册目录

图 2. 小鼠皮层干细胞培养流程图（使用神经球系统扩增）

图 3. 小鼠皮层干细胞培养详细步骤（使用神经球系统扩增）

除多种神经细胞的培养方案外，手册还涵盖神经元、神经胶质细胞标志物的完整罗列，神经炎症的分析策略等。

点击下方图片，get 完整手册

干货内容抢先看

在神经干细胞的研究中，会遇到许多细节问题，在 Bio-Techne 的手册中都可以找到相应的解答，来看看师妹在小鼠皮层干细胞培养中遇到的这些麻烦，都是怎样解决的～

问题 1：在尝试离心细胞以去除上清液并重悬时，发现细胞团块不易打散，导致细胞计数不准确。

有效离心和重悬细胞也是需要技巧的。一定要根据实验需求使用适当的离心速度和时间。如复苏冻存的细胞时，离心速度为 200 g，离心时间 5 分钟；细胞传代时，离心速度为 100 g，离心时间 5 分钟。离心后，应轻轻拍打离心管使细胞团块松散，然后加入适量的培养基轻轻吹打，使细胞均匀分散。

注意要点：

● 使用适当的酶：使用胰蛋白酶以破坏细胞间连接，使细胞易于分离。

● 轻轻吹打：使用无菌的吸管或枪头反复轻轻吹打培养皿表面，帮助细胞分离。

问题 2：神经干细胞的分离培养已经走上正轨，但是培养基更换和营养因子添加的频率怎么安排呢？

每天向培养基中添加新鲜的 EGF 和 FGF 储备液，以保持细胞生长所需的生长因子水平；每隔四天根据神经球的数量完全更换一次新鲜的培养基，以维持适宜的营养物质和废物清除。

注意要点：

● 无菌操作：在添加任何营养因子或更换培养基时，都应在无菌条件下进行，以避免污染。

● 温度调节：确保所有添加的培养基或储备液都已预热至 37 ℃，以模拟细胞的体内环境。

● 观察细胞状态：在更换培养基或补加营养因子前，应检查细胞的形态和密度，以确定是否需要调整补加频率或培养基更换周期。

问题 3：细胞增殖到一定密度后要进行传代实验，新手上路该怎么做呢？

根据手册中的详细步骤：1）5～7 天后，转移漂浮的神经球并离心，去除上清液。2）向部分解离的神经球中加入含有丝分裂原的预热的完全 NSC 基础培养基，重悬细胞并进行细胞计数。3）将神经球悬液加入到含 20 ng/mL EGF 和 20 ng/mL bFGF 的新鲜、预热的完全 NSC 基础培养基中进行培养（根据实验需求调整细胞密度）。

注意要点：

● 为实现神经球的最佳解离，建议使用 P200 移液管。

● 细胞团重悬并计数的注意事项可参考问题 1（见上文）。

手册中除了详细的实操方法，还涵盖了常用的神经干细胞培养、分化及扩增、表型/功能检测的重组蛋白、抗体、小分子化合物、培养基添加剂等等，带你一起弯道超车！

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内容策划：邹礼平

内容审核：钟可可

题图来源：图虫创意