开题倒计时 30 天，师兄帮我把转染效率从 0 拉到 80%

师妹

开题倒计时 30 天，还没有 data！我最近的转染效率又这么低，做课题真的太难了！

难转的细胞建议用病毒载体，感染效率高，关键还能往下筛选稳定株，后续做一些列功能实验也会更有说服力！

师兄

不少做基因调控的科研人员，都知道病毒载体是基因调控的有效工具，但对慢病毒（LV）、腺病毒（ADV）以及腺相关病毒（AAV）载体傻傻分不清，一字之差，差别真的那么大吗？是的，载体是否合适直接决定基因编辑效率（可能是 0% 和 80% 的差别）。

如何根据实验目的和细胞类型，选择合适的病毒载体？不同的病毒载体，在病毒包装和感染时的关键点在哪？如何获得更高的转染效率和细胞存活率？利用 AAV 载体进行体内基因编辑，如何提高成功率？

为了解决大家的科研难题，3 月 26 日 15:00 汉恒生物张笑迎老师为大家带来「吃透工具病毒，教你轻松搞定基因调控」专题直播，详细介绍三种病毒工具以及不同病毒载体感染特点应用以及常见问题和注意事项，更有实验细节分享和疑难解答。报名观看直播还能参与抽奖互动，30 份好用又好看的桌垫包邮送～

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常见病毒载体种类及选择

腺相关病毒（AAV）是微小病毒科家族的成员之一，其直径约 20～26 nm，含有 4.7 kb 左右的线状单链 DNA 作为基因组。体内基因调控和基因治疗的明星载体之一。常用于神经、代谢研究领域。

慢病毒载体（Lentivirus）是一类改造自人免疫缺陷病毒（HIV）的病毒载体，是逆转录病毒的一种。可利用逆转录酶将外源基因整合到基因组中实现稳定表达，具有感染分裂期与非分裂期细胞的特性。常用于稳定株构建，细胞功能研究，瘤内注射；肿瘤、神经研究领域。

腺病毒（ADV）是一种无包膜的线性双链 DNA 病毒，直径在 100 nm 左右。腺病毒可在短时间内快速表达，一般 1～3 天即可达到高峰。常用于肿瘤、代谢领域，主要用于体外难感染的细胞,快速表达或短期表达。

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病毒包装及感染流程

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病毒包装：质粒 DNA 和其他包装质粒共转染至细胞（包装细胞，如 293T）产生病毒；

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病毒浓缩：将合并的病毒上清液取出，离心收集。配置病毒浓缩液，浓缩病毒以待用；

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细胞感染及感染效率检测：一般取感染 72 h 后的细胞，进行流式染色、荧光拍照、Q-pcr 或 Western blot 效率验证；

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动物组织感染及感染效率检测：若使用纯化腺病毒，注射感染后 3～4 天可取样检测感染及表达效果；若使用腺相关病毒，注射感染后 2～3 周可取样检测感染及表达效果。如带荧光标记，可通过组织冰冻切片观察感染效率；目的基因表达效果可通过 Q-pcr 和 Western blot 检测验证。

内容策划：邹礼平
内容审核：朱晓芳

题图来源：图虫创意