虾饲料、虾塘底泥检出致病病毒DNA，虾农慌得一批！陈昌福：检测机构乱来的！

文/华中农业大学陈昌福，武汉科研时代生物技术有限公司 周鑫军

正文/4189字

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陈昌福有话说

关于采用PCR技术，检测各种样品中致病性生物的DNA，造成对饲料企业和水产养殖业者的各种困惑的问题，我们在前年9月与10月份于《农财宝典·大国渔业》微信公众平台上，连续发布的几篇小文章中，已经将PCR技术的基本原理说的比较清楚了。

但是，至今为止，一些水产养殖动物病害监测机构，在利用PCR技术作为检测病害的方法与手段时，关于如何正确地选择检测样品的问题，至少在部分检测机构似乎依然尚不清楚！

在我们过去已经发布的相关文章中，我们已经明确地指出，譬如将对虾饲料作为检测样品，检测对虾饲料中含有的某种致病性病毒的DNA，即使检测到阳性的结果，也是不能作为对虾饲料能诱发养殖对虾发生某种病毒病的依据的。

现在又有检测机构将养殖对虾池塘底泥作为检测样品，结果是在底泥中毫无意外地检测到了某些致病性病毒的DNA。这种阳性检测结果正在导致许多对虾养殖业者的困惑，他们不敢再向这些检测到阳性结果的养殖池塘中投放虾苗，多次采用大剂量的消毒剂，对出现阳性结果的养殖池塘进行消毒后，也发现是无济于事的！

这篇小文章在简要回顾过去发生的同类事件基础上，说明了养殖池塘底泥中致病性病毒DNA的来源，为什么这类阳性结果不能说明会导致养殖对虾发生病毒性疾病的原因，旨在帮助广大的对虾养殖业着消除误解！

即使灵敏、快捷的PCR检测技术

也需要正确地运用

摘要：本文在简要地回顾了水产养殖动物病害部分监测机构，利用聚合酶链式反应（polymerase chain reaction，PCR）技术，检测养殖对虾饲料中的致病性生物的DNA等遗传物质，获得的阳性检测结果，造成了对虾养殖业者与饲料生产企业各种迷惑的基础上，对将对虾养殖池塘底泥作为检测样品中的问题。根据这些案例对水产养殖业者造成的各种迷惑，指出即使灵敏、快捷的PCR检测技术，也需要正确地采集检测样品，只有获得正确的检测结果，才能用于指导对虾养殖业者科学地预防对虾养殖过程中的各种疾病。

关键词：养殖对虾；白斑病毒综合征；疾病预防；监测技术；聚合酶链式反应

通过监测危害水产养殖动物的各种致病性生物（细菌、病毒和寄生虫等）的动态，对于科学、精准地预防是水产养殖动物的疾病，无疑是具有重要现实意义的。不过，只有实施科学地监测结果，对于科学地指导水产养殖业者预防水产养殖动物疾病才是有意义的。要获得对水产养殖动物致病性生物正确的监测结果，若能借助现代具有灵敏、快捷特点的各种精密仪器与设备的话，对于满足人们实现对水产养殖动物疾病监测过程中灵敏、快捷的要求，当然是会有帮助的。不过，任何现代的灵敏、快捷精密科学仪器与设备，均需要正确地操作和科学地选择检测样品。如果用错了检测方法或者选错了样品，其病害监测结果不仅会失去意义，还可能会对相关的水产养殖业者造成各种迷惑。这里仅列举最近在我国一些水产养殖区域发生的部分事例，以说明即使采用现代的灵敏、快捷、精密科学仪器，也需要正确地操作和科学地选择检测样品，才能实现科学监测水产养殖动物病害的目标。

1.利用PCR技术检测对虾饲料中的WSSV

利用聚合酶链式反应（polymerase chain reaction，PCR）技术，作为监测水产养殖动物疾病的分子生物学方法，因其PCR技术具有灵敏、快捷的特点，现在已经是国内、外监测水产养殖动物疾病的常用技术与方法。

因为通过PCR技术，监测的是某种病原生物在检测样品中存在的遗传物质——脱氧核糖核酸（deoxyribonucleic acid，DNA，以下一律称为DNA）的片段。因此，利用PCR技术监测水产养殖动物致病性生物的结果，是可以证明被检样品中曾经存在过这种致病性生物。譬如，当对虾养殖业者在采购虾苗时，为了防止通过采购的虾苗将能危害养殖对虾的致病性生物带入养殖对虾池塘，可以从拟采购的虾苗中，采集少量虾苗作为检测致病性生物的样品，将其送到水产动物疫病检测机构，通过快速检测其虾苗体内的致病性生物携带状况，作为对虾养殖业者决定是否可以采购这批虾苗的科学依据。如果检测机构利用PCR检测技术，检测送检虾苗体内携带有白斑综合症病毒（white spot syndrome virus，WSSV）DNA时，即获得了阳性检测结果的话，对虾养殖业者正确的做法就是放弃采购这批虾苗，以避免将虾苗携带的WSSV带入新的养殖区域。

广大的对虾养殖业者需要注意的是，上述的检测到的WSSV的所谓阳性结果，就是利用PCR技术检测到了活体对虾苗体内存在WSSV的DNA等核酸物质，这个阳性检测结果也就是说明虾苗体内携带有活着的WSSV，而活着的WSSV是具有传染性的。

如果利用PCR技术，检测的样品不是利用的活对虾虾苗，而是送检的对虾饲料，并且在对虾饲料时检测到了阳性结果，也就是在对虾饲料中检测到了WSSV的DNA等核酸物质的话，能说明的是什么问题呢？

前几年，我国南方的某大型饲料企业负责人向本文作者反映，有一部分对虾养殖业者在遭遇养殖对虾大量死亡后，为了寻找导致养殖对虾大量死亡的原因，而将对虾饲料送到水产养殖动物疫病监测机构，检测机构利用PCR技术在对虾饲料检测到了WSSV的DNA等核酸物质。于是，对虾养殖业者认为是带有病毒的对虾饲料，引起了养殖对虾的大量死亡。不仅拒绝向饲料生产企业支付购买对虾饲料的货款，还要向饲料生产企业索取因为对虾死亡的经济赔偿。

为了消除这些对虾养殖业者的误解，我们先后在《农财宝典·大国渔业》微信公众平台上，发布了以下三篇文章：

在这3篇小文章中介绍了PCR技术的基本原理，对虾饲料中WSSV的DNA的来源，以及饲料中存在的WSSV的DNA片段，为什么不会导致养殖对虾发生对虾白班综合征的原因。

经过向对虾养殖业者解释PCR技术的基本原理，不少对虾养殖业者明白了饲料中存在WSSV的DNA的原因，对虾养殖业这与饲料生产企业之间的问题与矛盾也就基本上解决了。

2.利用PCR技术检测对虾饲料中的EHP

后来，在我国东北的某饲料生产企业又向我们反应出原理基本相同的问题，不过不是从对虾饲料中检测到WSSV的DNA片段，而是水产养殖动物病害检测机构，在对虾养殖业者送检的某饲料公司生产的对虾饲料中，利用PCE技术检测到了虾肠肝胞虫（Enterocytozoon hepatopenaei，EHP）的DNA片段。采购该饲料企业生产虾饲料的对虾养殖业者，也是准备以对虾饲料中检测到EHP的DNA片段的阳性结果为由，准备拒付欠下的对虾饲料生产企业的饲料款。

在得到相关饲料企业的求助信息后，我们在进一步了解实际情况的基础上，在《农财宝典·大国渔业》微信公众平台上，发布了题为“”（点击蓝色字阅读回顾报道）的小文章。

在这篇小文章中，我们在介绍EHP的部分生物学特性的基础上，再次提出不宜依靠PCR等分子生物学技术，通过检测对虾饲料中可能存在的某些致病生物的DNA等遗传物质的阳性结果，就做出这种对虾饲料是可以传播某种疾病之结论的。

同时，我们在这篇文章中还提出了应该参照《虾肝肠胞虫诊断规程，SC/T-7232-2020》中，对完成EHP诊断采样样品的规定，即检测样品应该是凡纳对虾、斑节对虾、日本囊对虾等养殖活对虾，还可以是活着的轮虫、卤虫等容易携带EHP的饵料生物，这些诊断用样品中是不包括人工制造的对虾饲料的。采用PCR技术检测对虾饲料中的EHP的DNA物质，并且将检测结果判为阴性或者阳性，是极不合理的，也是不科学的！最后还提出了各地水产动物疫病检测机构，应该立即停止这种错误采集样品做法的建议。

3.利用PCR技术检测对虾养殖池底淤泥中的WSSV

最近几年，温棚养虾模式在我国一些地方的推广速度较快，而养殖对虾的各种传染性疾病在养殖过程中暴发与否，往往就成为温棚养虾模式成败的关键因素。 在严重危害养殖对虾的疾病中，WSSV就是危害养殖对虾的病毒性疾病之一。 养殖对虾的白斑综合征一旦发生后，迄今为止是没有理想的治疗方法的，就可能意味着这个温棚内的养殖对虾会全军覆没。

对虾养殖业者因为担心养殖对虾池塘中残存的病原性生物，可能对新放入对虾苗种造成传染并产生危害，在放养对虾苗种之前，采集对虾养殖池塘底泥送到水生动物病害检测机构，委托其检测底泥中致病生物的残存状况。部分水产养殖动物病害检测机构，利用检测试剂盒和PCR技术，对养殖对虾池塘底泥进行了检测。结果证明无论是利用检测试剂盒还是采用PCR技术，均可以从对虾养殖业者送检的底泥中检测到WSSV的DNA片段（图1）。毫无疑问，广大的对虾养殖业者在看见这种阳性检测结果时，又彻底被迷惑了，再也不敢向检测结果呈阳性的养虾池塘投放虾苗了。

图1我国南方某对虾养殖区域养殖对虾池塘底泥中病原生物检测报告

在此，我们愿意再次说明，利用PCR检测技术检测养殖对虾池塘底泥中的致病性生物时，监测到的是养殖对虾底泥中的致病性生物遗传物质DNA的片段。出现阳性检测结果也只能说明在这个养殖对虾池塘中，曾经出现过WSSV，也可能发生过养殖对虾的白斑综合征。但是，利用PCR技术监测的这种阳性结果，尚不能说明作为检测样品的底泥中，是否还存在活着的WSSV。只有活着的WSSV才具有感染活对虾的致病功能，而WSSV的DNA片段，是已经失去了这种能感染活对虾致病功能的。

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作者：华中农业大学陈昌福；武汉科研时代生物技术有限公司周鑫军。

编辑：郑燕云

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