乙肝表面抗原远超上限，金标法却是阴性？

*仅供医学专业人士阅读参考

是“谁”干扰了检验结果？

撰文丨陈晓玲

前言

乙型肝炎病毒（HBV）感染是全球重大的公共卫生问题。据WHO估计，2019年全球有2.96亿慢性HBV感染者（流行率为3.8％），150万人新发感染，82万人死于HBV感染相关的疾病，包括肝衰竭、肝硬化、肝癌等。在中国，约有8600万乙肝表面抗原（HBsAg）阳性患者（流行率为6.1％），90%以上的原发性肝癌与慢性HBV感染有关[1]。HBsAg是由HBV在感染的肝细胞中过量生产且在血液中大量循环，HBsAg检测是目前判断乙型肝炎病毒感染最直接的病原标志，其检测的准确性和可靠性对于受检者至关重要，也对乙肝的早期诊断及早期治疗具有十分重要的意义[2]。

案例经过

患者男，74岁，主诉腹胀腹痛1月余。

【现病史】患者1月余前无明显诱因出现腹胀腹痛，右上腹为主，伴恶心呕吐，呕吐物为胃内容物，无发热，无胸闷胸痛，无头晕乏力，2023年11月于北京中医药大学深圳医院对症治疗（具体诊疗经过不详），症状减轻后出院，部分诊断，乙肝后肝硬化失代偿期，腹腔积液，脾大，后腹痛仍反复，伴发热，2023年12月14日再次外院就诊，予抗感染（头孢呱酮舒巴坦）治疗后症状减轻，目前仍有腹胀，低热，双侧腰背部疼痛，因全身基础疾病较多外院建议转诊，遂于我院急诊就诊，以"胆总管结石"收入院，起病以来，患者精神睡眠差，胃纳差，便频，大便近2天未解，体重近期减轻7.5kg。

【既往史】既往慢性淋巴细胞白血病／小细胞淋巴瘤，未服药。既往发现血糖升高，目前使用磷酸西格列汀100mg qd ，达格列净10mg qd ，利拉鲁肽1.2mg睡前，门冬胰岛素8ui三餐前，2023年12月14日至24日于北京中医药大学深圳医院就诊，出院诊断：乙肝后肝硬化失代偿期，腹腔积液，脾大，高血压病，2型糖尿病，慢性萎缩性胃炎（未见报告），胃溃疡（未见报告），食管静脉瘤（未见报告），前列腺炎（未见报告），脑缺血灶（未见报告），肺结节，肺气肿，胸腔积液，肾结石（未见报告），心包积液（未见报告），颈内动脉斑块（未见报告），现双耳听力受限，既往乙肝，近期开始抗病毒治疗（恩替卡韦 QD )，无外伤史，有胆囊结石切除手术史及5-6年前ERCP手术史，双眼白内障手术，无输血史，预防接种史不详。

【过敏史】无

【个人史】原籍出生长大，无外地居住史，无疫区居住史，无疫水、疫源接触史。无吸烟史，无嗜酒史，无冶游史，无放射性物质、毒物接触史。

【婚育史】已婚

【家族史】家族中无相关疾病记载，无传染病及遗传病等病史。

案例分析

患者2023年12月25日检查术前四项，用化学发光微粒子法（CMIA）检测（雅培Alinity）HBsAg结果数值>250IU/ml，但是用金标法（艾博）进行复查时，却是阴性的。

为什么两种方法学检测会不一致？

难道出现了钩状效应（即HOOK效应）？HBsAg浓度太高，导致金标法出现后带现象？于是我们分别用生理盐水和阴性血清（乙肝两对半五项全阴）做了11倍和100倍稀释，结果均为阴性，同时将稀释100倍的标本重新上Alinity检测，生理盐水稀释结果为68.80IU/mL，阴性血清稀释结果为66.22IU/mL。稀释100倍后，HBsAg浓度下降，但是金标结果仍然是阴性的。当天其他Alinity检测HBsAg阳性的标本，金标（艾博）复查都符合。那么可以排除钩状效应和金标试纸条失效问题。

这个HBsAg结果到底是阳性还是阴性？是Alinity假阳，还是金标假阴？

查阅多篇文献内容[3-5]，我们做了简易的抗体中和试验。找了一个HBsAb数值分别为56.26mIU/mL和>1000mIU/mL，其他四项为阴性的血清，以稀释100倍的血清量混合，与HBsAb数值为56.26mIU/mL混合的血清检测结果为58.69IU/mL；与HBsAb数值为>1000mIU/mL混合的血清检测结果为30.38IU/mL，跟之前阴性血清稀释100倍的结果（66.22IU/mL）比数值下降了一半，由此证明抗体中和试验阳性。

后续我们又用罗氏602、酶联免疫吸附试验（ELISA）、乙肝DNA定量和万孚的金标试剂进行复查，结果均为阳性，此外还做了乙肝分型。具体结果如下表：

综上所述，我们可以确定此标本HBsAg是阳性的，艾博的金标试剂出现了假阴性。除此之外，我们还加测了此病人的乙肝两对半其他项目，发现CMIA为大三阳模式，而ELISA只有HBsAg和HBcAb阳性。

总结

一般来说，影响抗原抗体反应的因素有两大方面，一是反应物自身的因素，包括抗原和抗体因素；二是反应环境条件，包括电解质、酸碱度和温度等。我们这个案例抗原相同，在同一个实验环境操作，温度应该相差不大。综上所述，艾博的金标试剂出现了假阴性最大的可能原因为抗体因素不同（即艾博试剂本身包被的单克隆抗体不同）。不同来源和/或不同纯度的抗体，反应性各有差异，抗体的浓度、特异性和亲和力都影响抗体抗原反应。另外，病人血液里面是否有其他特殊物质，例如疏水性物质等，这也可能导致艾博试剂假阴性。

另外，CMIA和ELISA检测乙肝两对半模式不一样，是因为HBeAg检测方法学敏感度为：化学发光方法学>ELISA[6-7]，而且用CMIA检测此标本时发现HBeAg数值比较低，靠近临界值，所以后面ELISA做出来阴性也是在情理之中。

不同的方法，试剂品牌都有不同的灵敏度和特异度，也有一定的局限性，检测结果受试剂原料，标本和病人自身疾病等情况的影响，在做一些重要检验项目，特别是传染病项目，例如HBsAg、HCV、TP、HIV等时，我们最好能使用两种方法学核对后，才发结果。结果不一致时，需要分析原因并判断，发出准确的报告，以免造成不必要的医疗纠纷，对自己也为病人负责，做个出色的检验人。

参考文献：

[1]. 薛荣荣,蔡炳冈,咸建春.HBsAg及HBV DNA定量与HBV相关肝病的诊断[J]Chinese Hepatology,202328(12).DOI:10.14000/j.cnki.issn.1008-1704.2023.12.008

[2].王强,李文郎,黄国清,等. 确认试验在乙肝表面抗原弱阳性样本判定中的应用[J]. 国际检验医学杂志,2013,34(5):619-620. DOI:10.3969/j.issn.1673-4130.2013.05.050.

[3].刘荣静,尤芳芳,习浩,等. 乙肝表面抗原检测确认试验方法的建立[J]. 中国热带医学,2011,11(7):815-817.

[4].金胜鑫,温怀凯. 基于化学发光微粒子免疫分析法的乙型肝炎表面抗原中和试验方法的建立[J]. 医学研究杂志,2013,42(6):202-204. DOI:10.3969/j.issn.1673-548X.2013.06.058.

[5].吴斌. 乙型肝炎病毒表面抗原弱反应性结果的确认[J]. 湖南师范大学学报（医学版）,2010,7(2):50-51,53. DOI:10.3969/j.issn.1673-016X.2010.02.018.

[6].徐晓莉,高玉芳,张敏杰,等. CLIA法检测血液透析患者HBV血清标志物的临床价值[J]. 国际检验医学杂志,2017,38(20):2898-2900. DOI:10.3969/j.issn.1673-4130.2017.20.038.

[7].李岩,姜梅,陈松楠,等. 金标法与酶联免疫吸附法检测乙肝表面抗原的方法学比较[J]. 中国疗养医学,2010,19(4):361-362. DOI:10.3969/j.issn.1005-619X.2010.04.057.

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本文来源丨检验医学网

责任编辑丨舒豪

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