GPCR靶点药物筛选|药物靶点开发服务|gpcr靶点药物研发|药物靶点

G蛋白偶联受体（G-protein-coupled receptors，GPCR），是已知的最大的细胞表面膜蛋白家族。目前有约40%药物筛选是针对GPCR，且有超过50%的市售药物是通过GPCR发挥药效的。因此，GPCR也成为了药物筛选的“宠儿”。

GPCR与G蛋白偶联，当配体与GPCR结合后激活通G蛋白，激活后的G蛋白通过不同G蛋白亚基会产生不同的生物产物，将胞外化学信号转导到胞内，影响细胞的行为，在各种生理功能中发挥着关键作用。其中Gαs-偶联受体激活腺苷酰环化酶(AC)会导致胞内cAMP增加；Gαi-偶联受体激活腺苷酰环化酶(AC)会导致cAMP降低；Gαq偶联受体激活磷脂酶C(PLC)，产生IP3，IP3能使细胞内 Ca2+浓度升高（图1）。因此，通过检测不同第二信使的产生可以达到筛选靶向GPCR药物的目的。

图1. GPCR激活后信号转导及检测原理示意图

Gαq通路检测的方法包括细胞内钙离子浓度变化荧光检测法和HTRF-IP1检测法。细胞内钙离子荧光检测法是通过用钙离子敏感荧光探针配合实时荧光检测仪器FLIPR来检测细胞内钙离子的释放情况（图2）。HTRF-IP1检测法是基于荧光共振能量转移的一种检测方法，通过被标记IP1和胞内产生的IP1共同竞争结合Anti-IP1，达到检测IP1浓度变化的目的（图1）。

图2.钙流检测原理示意图

Gαi和Gαs通路检测可以使用TR-FRET-cAMP检测法，一种基于荧光共振能量转移的方法，可以稳定准确的检测细胞中cAMP的变化，进而反应GPCR的激活或抑制情况，值得注意的是，Gαi因为其激活后抑制cAMP的产生，需要添加激活腺苷酰环化酶的Forskolin来检测其活性（图1）。

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