微孢子虫疾病的前世今生！养殖户不可多得的一手资料！

微孢子属于孢子内寄生虫，具有微小的孢子。微孢子寄生于许多甲壳类、昆虫、吸虫中，其中有多个品种通常寄生在虾身上，并导致感染疾病。

一、微孢子概述

微孢子虫结构特征：微孢子的身体结构很简单，外有基丁物质形成的膜，有孢子状的囊肿，里面有极丝。

图1：1998年，研究人员发布的微孢子结构。

图：微孢子发育周期

二、虾身上微孢子虫引起的疾病

1、微孢子的流行史

2000-2002年在泰国（根据 Kanokporn Chayaburakul，2004 年）发现养殖斑节对虾出现严重的缓慢生长疾病，其病原体是由一种寄生在胰腺肝脏的微孢子。2002年，该病造成近3亿美元的损失。

2009年，据Somjintana Tourtip和CTV报道，虾胰肝中致病微孢子是寄生内孢子（Enterocytozoon hepatopenaei）。

虾肝肠胞虫（Enterocytozoon hepatopenaei，EHP）微孢子被确定寄生在虾肝上。从无性孢子合生到成年孢子的阶段，都寄生在管状胰腺肝细胞（宿主）的细胞中。有许多无性孢子核直接粘附在细胞物质上，在虾细胞表面含有大量的小颗粒（Bleb）。

小孢子有丝分裂繁殖发生在寄生虫发育的早期阶段，寄生虫细胞内形成大量的孢子母细胞。致密圆盘和丝状前体在寄生虫早期的细胞质中生长，从受精卵表面形成原孢子。 孢子椭圆形，大小0.7x1.1μm，单核，囊肿前有5-6环丝状体，后有液泡，囊肿尖端有圆盘状附着于丝状体，细胞壁薄而致密。

细胞壁由质膜、约10nm厚的发光细胞内层和约2nm厚的细胞外致密层组成。设计用于扩增寄生虫SSU rRNA基因组DNA片段的引物在genbank (GenBank FJ496356) 上的大小为848bp。 的核苷酸序列显示出84%的同源性，扩增的片段序列与Enterocytozoon bieneusi 相似。

根据结果的特性，该寄生虫属于肠细胞虫科。 虫细胞质和SSU rRNA序列不同于E. bienseusi为16%，因此该寄生虫被认为是Enterocytozoon属的一个新品种。

2、微孢子病理迹象

状态：生病的虾活动缓慢，游到池塘边，死亡（图2）。虾的死亡率迅速增加，1-2周内虾死亡60-70%，如果虾病重，死亡率可以高达100%。

外部迹象：患病的虾没有典型的疾病迹象，通常虾具有生长缓慢和分群（图3）。

内部迹象：疾病轻微感染时，没有明显的症状，严重时，虾胰肝坏死严重，当虾的体质虚弱，那么肝胰腐烂非常快。

病理组织的迹象：胰腺肝管模型大部分坏死（空心），并含有大量的脂肪滴（图4）。大张管模型上的一些细胞充满了小颗粒（图5，6，7，8）

图2：虾游到岸边死亡（2010年8月样本）

图3：病虾慢大，分群（2010年8月）

图4：虾胰肝细胞中，成熟的孢子充满小颗粒。

图5：虾胰肝中的成年孢子。

图6：肝胰坏死。

图7：胰脏肝管细胞张大，充满小颗粒（H&E染色，2010年8月）

图8：胰脏肝管细胞张大，充满小颗粒。

3、微孢子病原体

病原体在一些养虾场初步调查，确定它们类似于肠细胞虫属肠细胞虫科的小孢子，它们是细胞内寄生虫。

成熟孢子的革兰氏染色在黑虎虾肝胰腺细胞的细胞质中呈现紫色（图 9,10）。

成人孢子电子显微镜垂直切成椭圆形，尺寸为0.60 x 1.86μm，前面有囊性极（PP），前端为粘附盘（ad），后面有液泡（PV），中间有1个核（N），上两侧有细丝 (pf)（图10-11）。 孢子阶段在宿主细胞质（肝胰腺细胞）中发育，宿主细胞表面含有许多小颗粒（泡）。

图9：虾胰肝中的成年孢子

图10：虾胰肝中的成年孢子

图11：孢子切椭圆形，正面有有囊性极（PP），前端有附着盘（ad），后面有液泡（PV），中间有1个核（N），两侧杆有细丝 (pf)。

图12：虾胰肝管表皮细胞中的成熟细胞

4、微孢子虫疾病的分布

微孢子寄生在许多甲壳类动物中，目前已描述的品种：八孢虫、匹里虫、单极虫、Enterocytozoon hepatopenaei等50多种，分别在30种海水虾中（包括：南美白对虾、斑节对虾等），淡水虾，螃蟹和龙虾中发现。此外，微孢子寄生在昆虫，吸虫当中。

根据（Somjintana Tourtip等人，2009年）的研究，泰国发现微孢子虫寄生在斑节对虾 ( Penaeus monodon ) 的肝胰腺中； （M. Toubiana 和 ctv，2004）的研究显示：马达加斯加三种虾（印度明对虾、斑节对虾和短沟对虾发现微孢子虫；（GD Stentiford等人，2007）的研究显示，螃蟹身上发现微孢子虫病（Enterospora canceri ）。

初步调查表明，微孢子虫可以感染虾苗，在投苗后20天到120天内，都可能出现疾病。当天气波动时（如：降雨、气温变化、水环境污染），这种疾病经常出现。

三、微孢子疾病的诊断和预防方法

1、微孢子疾病的诊断方法

-病理组织方法：革兰氏染色法、吉姆萨染色、H&E染色

-电子显微镜检查。

-分子生物学方法：SSU rARN基因组的DNA扩增技术

2、微孢子疾病预防方法

微孢子属于孢子寄生组，它们有相当稳定的的外壳，因此很难使用治疗药物，因此主要措施是预防养殖虾的疾病，基于以下原则：

- 从环境中杀死病原体：使用TCCA在池塘底部和水环境中杀死病原体；使用微生物制剂清洁环境，减少换水量，防止病原体从外部环境进入，如果换水必须从经过消毒的沉淀池中取水。

- 增加对虾的抗病能力：服用一些微生物制剂（β-葡聚糖、维生素等）喂虾，增加对养殖虾的抗病能力。

- 修复虾肝胰腺坏死：服用多氨基酸、酶、多维生素、多种微量元素等药物，快速恢复虾的肝胰腺。