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内毒素检测的方法有哪些?

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内毒素的检测有传统的家兔热原试验(rabbit pyrogentest,RT)、鲎试验法(limulus test,LT)以及其他的一些特殊方法。

(一)家兔热原试验法

此方法即将一定量的被检标本静脉注人家兔体内,观察其注射后的发热情况,以决定所检标本中有无热原存在。RT法为一种定性检测内毒素的方法,应用历史较久,此方法本身有许多限制,如家兔对内毒素在反应上有个体差异﹑敏感度不高、不能定量测出内毒素等。

(二)鲎试验法

细菌内毒素检查法也称之谓鲎试验法(LT法)英文为Bacterial Endotoxins Test,它是在1964年由美国学者Levin和Bang所发现,并在1968年正式建立的一种定性或定量检测微量细菌内毒素的分析方法。由于其灵敏度高,特异性强而且操作简便快捷,目前在许多科研和应用单位均得到了突飞猛进的发展和推广应用。自此方法建立以来的30年间,其在细菌内毒素本质和方法学的研究方面更是不断进步和发展,加之各种新型试剂和新型仪器的开发,不仅在药学,而且在微生物学及临床检验等领域的开发应用更为广泛。

LT法又称鲎变形细胞溶解物试验(limulus amoebocytelysate,LAL),是目前检测内毒素最敏感的方法。它比RT法敏感10~100倍以上,可测出微量的内毒素(0.1 ~ 1ng/ml),用微量光电法及其他改进方法可测到微微克(pg/ml)的水平。而在RT法中,敏感性高的家兔需注射1.5ng/kg 才能引起发热,而敏感性低的却需要注射0.5 ~10μg/kg才能引起发热。

LT法可广泛地用于革兰氏阴性菌感染的快速诊断,对患者的血液、尿液及脑脊液可进行直接的检查。此法亦可用于检查各种注射剂内是否有内毒素污染。

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