凝胶法常用方法之试管法

在凝胶法中，经常使用的方法就包括试管法。

那在凝胶法中，试管法的使用方法是怎么样的呢？

首先需要把供试品和鲎试剂等量加入试管中，轻摇晃使其充分混匀，再将该试管置于水浴中静置，取出后再观察该试管的凝胶是否形成。试验时，需要作试验管、阳性对照管、阴性对照管及阴性抑制对照管共4种，来作对照试验。

1.试验管

需要取出0.1ml的样本和0.1ml的鲎试剂。水、注射液等一般样本在试验前是不需要进行处理的，但是如果血液、腹腔渗出液等其他液体就必须在试验前就进行处理，因为这些样本可能存在鲎试验法反应的抑制物。所用的鲎试剂需要在试验前就对其以标准内毒素进行校准，且是可以进行试验的。

2.阳性对照管

分别取出0.1ml的标准内毒素和0.1ml的鲎试剂，在使用标准内毒素时应以WHO标准品进行校准标定。在实验中应用的内毒素浓度需要根据鲎试剂的灵敏度来确定，一般来说，范围在1～5 ng/ ml即可。

3.阴性对照管

只需取0.1ml的无热原水和0.1ml的鲎试剂即可。

4.抑制对照管

需要取0.1ml的供试品和0.1ml的标准内毒素和0.2ml的鲎试剂。

上述四管均放入37℃孵育1～2小时观察结果。如形成凝胶坚固，试管倒转180度不变形，则记为（++）；如混浊度和粘滞性明显增加，呈胶体状，但倾斜试管时变形，则记为（+）；如液体流动自如，透明无变化或稍混浊，有少量颗粒细絮片状物，则记为（-）。

以上对照的4支试管需要在37℃的环境中静置1~2个小时，再对试管进行观察，以此来得出结果。如果试管中形成的凝胶是凝固的，且将试管翻转180度都不会变形时，则该试管被记为（++）；但是如果试管出现了混浊的情况而且试管内还有粘滞性的情况，整体是呈胶体状的，将试管倾斜时液体也会呈倾斜，则记为（+），如果整个试管的液体是非常流动的，且试管内部呈透明色或者只有轻微混浊，且出现了些许颗粒细絮物，则记为（-）。

如果供试品中出现了抑制物，可以把供试品进行处理，比如将其进行稀释，或者用其他方法将抑制物清除，再重新进行检测。如果这些方法都没有效果的话，还可以采取其他细菌内毒素检测方法，比如家兔法（Rabbit pyrogen test）。