索氏抽提法测定粮食中粗脂肪时应注意的问题

脂肪广泛存在于许多植物的种子和果实中，测定脂肪的含量，可以作为鉴别其品质优劣的一个指标。脂肪含量的测定有很多方法，如抽提法、酸水解法、比重法、折射法、电测和核磁共振法等。目前国内外普遍采用抽提法，其中索氏抽提法（Soxhlet extractormethod）是公认的经典方法，也是我国粮油分折首选的标准方法。用索氏抽提法测定粗脂肪是最常用方法之一，但在使用中需要注意的方面很多。
1、样品的前处理
一般采集或送检的样品都有500~1000g左右，因此在粉样前应先将样品在样品盘中用四分法反复混合均匀，原粮用粮食分样器按操作规程分取样品。在粉碎过程中应尽量避免样品发热，若样品在粉碎过程中发热，应注意等完全冷却至室温后再称样。试样粗细度要适宜。试样粉未过粗，脂肪不易抽提干净;试样粉末过细，则有可能透过滤纸孔隙随回流溶剂流失，影响测定结果。有条件的建议使用锤式旋风磨，效果较好。
2、称取样品
称样前应提前30min开启天平，称取样品时，不要将样品放在定性滤纸上直接称量，而应放在无水硫酸纸上称量，因为定性滤纸吸水性太强，易造成误差。样品由于粗脂肪含量各不相同，因此在称取时不同的料称样量也有差异，一般粗脂肪含量在10%以上的每个平行样只需称取1.5～2.0g，若在10%以下需称取2.0～3.0g，定量称取好的样品应用滤纸筒完全包好，装样品的滤纸筒一定要紧密，最好在样品上方加一层脱脂棉;含多量糖及糊精的样品，要先以冷水处理，等其干燥后连通滤纸一起放入滤纸筒。用脱脂线绳扎紧确保样品不会漏出，滤纸包应尽量紧凑，长度不能长于索氏脂肪提取器提取室的高度。称取好的样品应在烘箱105~C士2℃烘2h以除去其中的水分。

3、做好抽提准备
(1）抽提瓶在使用前应先检查完全干净后放人2~3粒干净的沸石再放到烘箱中于105℃+2°℃烘2h，然后放于干燥器中冷30min，带上干燥洁净的手套称取抽提瓶的重量，反复直至恒重(前后两次称量差不超过0.00o2g)，要求两次烘干和干燥时间一致，第二次烘干时间不宜过长。
(2）使用索氏脂肪提取器前应先检查提取室应干燥无水再用。水浴锅在使用前应检查水面高度应达锅高的三分之二以上，要保证水面的高度超过提取瓶中乙醚的高度。冷凝管上端最好连接一个氯化钙干燥管，这样不仅可以防止空气中水分进入，而且还可以避免乙醚挥发流失在空气中，也可防止实验室微小环境空气的污染，如无此装置，塞一团干脱脂棉球亦可。
(3)水浴锅的温度应设在60℃左右。回流的总次数为50～60次，每小时8~12次，时间为8个小时，含油高的样品回流次数可增加至70次。加入乙醚的量一般为60~100ml。安装抽提设备时应注意抽提瓶和抽提室之间、抽提室和冷凝管之间的摩沙口一定要旋转拧紧，连接后用洗瓶滴水检查是否严密。
(4)乙醚必须使无水乙醚，因为如果含有其他的物质，如水，就可能将样品中的糖分或者无机物抽出，影响脂肪的测定结果。索氏抽提法测定脂肪最大的不足是耗时过长，如能将样品先回流1~2次，然后浸泡在溶剂中过夜，次日再继续抽提，则可明显缩短抽提时间。
4、抽提
在抽提过程中，经常发生的问题是:
(1)各冷凝管之间连接的胶管因使用时间过长老化而被忽视常常发生漏水现象，在使用前应注意检查，及时更换。在抽提过程中一定要注意各冷凝管之间连接的胶管摆放通畅，否则会影响冷凝管中水的流通，导致发生乙醚挥发流失的情况，因此在提取的过程中一定要经常观察水流是否通畅，水压是否稳定。有异常现象要及时调整，实验中经常因连接胶管摆放不畅使回水不通，乙醚流失停止回流。
(2)必须十分注意乙醚的安全使用。抽提室内严禁有明火存在或用明火加热。乙醚中不得含有过氧化物，保持抽提室内良好通风，以防燃爆。乙醚中过氧化物的检查方法是:取适量乙醚，加入碘化钾溶液，用力摇动，放置1min，若出现黄色则表明存在过氧化物，应进行处理后方可使用。处理的方法是:将乙醚放入分液漏斗，先以1/5乙醚量的稀KOH溶液洗涤2~3次，以除去乙醇;然后用盐酸酸化，加入1/5乙醚量的FeSO4或Na2SOa溶液，振摇，静置，分层后弃去下层水溶液，以除去过氧化物;最后用水洗至中性，用无水CaCl:或无水Na2SO4脱水，并进行重蒸馏。
5、回收
(1)回流前往提取室加乙醚或回流结束回收乙醚时注意打开通风系统。以尽量减少乙醚挥发对人体的危害。抽提结束后回收乙醚，小心地从水浴锅中将底瓶放稳在实验台上，回收时最好有两个人配合操作，确保达到万无一失。
(2）回收的乙醚不能再用于抽提粗脂肪，应在乙醚瓶外标明。将抽提室中的滤纸包倒出后，抽提室不要水洗即可放置在适当的地方。
(3）用滤纸或脱脂棉擦净提取瓶的外部然后放于烘箱中于105℃±+2℃烘2h，取出放于干燥器中半个小时后称重，再将提取瓶放于烘箱中烘30min冷却后称量，两次称量差不超过0.0002g即为恒重。将提取瓶放在烘箱内干燥时，瓶口向一侧倾斜45度防止挥发物乙醚易与空气形成对流，这样干燥迅速。这里恒重的概念有区别，它表示最初达到的最低重量，即溶剂和水分完全挥发时的恒重，此后若在继续加热，则因油脂氧化等原因会导致重量增加。在干燥器中的冷却时间一般要一致。此时烘干时间不宜过长，因为一些不饱和脂肪酸，容易在加热过程中被氧化而影响脂肪测定的最终结果。在没有真空干燥箱的条件下，只可以在100～105℃下干燥1.5～3小时。
6、测定结果
样品含量在10%以上时，相对偏差允许3%;在10%以下时，允许相对偏差5%。否则重做。