Peperomin E诱导分化差的转移抑制基因的启动子低甲基化

AbMole精研抑制剂十年，最新的科研动态不断与您分享。本期与您分享的是：Peperomin E诱导分化差的胃Ca中转移抑制基因的启动子低甲基化并减轻转移。

目前已有对Peperomin E（PepE）的报道，它是从Peperomia dindygulensis的整个植物中分离出来的一种天然的椰油木脂，在许多类型的Ca细胞（尤其是胃Ca）中显示出有效的抗Ca作用。然而，尚未充分阐明PepE对低分化胃Ca细胞转移的影响及其潜在的分子机制。本研究通过使用原位异种移植NOD-SCID小鼠模型评估了PepE通过伤口愈合和transwell测定体外对胃Ca细胞侵袭和迁移的影响以及对体内生长和转移的影响。使用比色DNMT活性/抑制测定试剂盒确定DNA甲基转移酶（DNMT）活性。使用生物层干涉术结合测定法测定对DNMT的PepE结合动力学。使用定量逆转录-PCR阵列和western印迹测定了PepE处理的胃Ca细胞中DNMT，AMPKα-Sp1信号分子和转移抑制基因的基因和蛋白质水平。通过电泳迁移率变动分析确定PepE对Sp1与DNMT启动子结合的影响。使用液相色谱结合电喷雾电离串联质谱法测定总体DNA甲基化水平。通过甲基化特异性PCR研究了沉默的转移抑制基因（MSGs）在胃Ca细胞中的甲基化状态。

结果表明，PepE可以在体外和体内剂量依赖性地抑制分化较差的胃Ca细胞的侵袭和迁移，并且对正常细胞的毒性较低。从机制上讲，PepE不仅与DNMT1的催化域共价结合并抑制其活性（IC50值为3·61μM），而且还通过破坏物理相互作用来下调胃Ca细胞中DNMT1、3a和3b的mRNA和蛋白表达。带有DNMT1、3a和3b启动子的Sp1的合成以及AMPKα-Sp1信号通路的介导。 PepE对DNMT的双重抑制活性使DNA总体甲基化相对较低，从而诱导MSG启动子甲基化不足（例如E-钙粘蛋白和TIMP3）并增强其在胃Ca细胞中的表达。总的来说，本研究数据表明PepE可能代表一种有前途的治疗性铅化合物，可用于干预胃Ca转移，也可能显示出作为DNA甲基化抑制剂用于表观遗传学Ca症治疗的潜力。

Dorsomorphin dihydrochloride（Abmole，M2238，纯度>99%）被用于细胞培养。

Fig. 1. In vitro and in vivo antitumor activity of PepE against poor differentiated GC cells.

Dorsomorphin（BML-275）二盐酸盐是一种有效的，可逆的AMPK选择性抑制剂，在细胞培养过程中起到重要作用。本研究中使用该试剂培养GC细胞系， 并应用于后续各项研究，取得喜人的结果。

鸣谢：Xin-Zhi Wanga, et al. Cell Physiol Biochem. 2018;50(6):2341-2364.