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hello~大家好
又到“艾”学习的周五啦
今天小编给大家介绍的主题有两个哦
它们就是—
PCR系列和去泛素化酶系列
1
高分辨率熔解曲线分析，有它就够了
高分辨率熔解曲线分析技术（High Resolution Melting），简称HRM，是一种检测基因突变、进行基因分型和SNP检测的新工具，可以迅速的检测出核酸片段中单碱基的突变。
HRM技术的基本原理是基于核酸分子物理性质的不同，不同核酸分子的片段长短、GC含量、GC分布等是不同的，因此任何双链DNA分子在加热变性时都会有自己熔解曲线的形状和位置。
HRM利用特定的染料可以插入DNA双链中的特性，通过实时监测升温过程中双链DNA荧光染料与PCR扩增产物的结合情况，记录高分辨率熔解曲线，从而对样品进行检测。
如在SNP的检测中，SNP位点由于不匹配双链DNA在升温过程中会先解开，荧光染料从局部解链的DNA分子上释放，从荧光强度与时间曲线上就可以判断是否存在SNP，而且不同SNP位点、杂合子与否等都会影响熔解曲线的峰形，因此HRM分析能够有效区分不同SNP位点与不同基因型。
这里推荐Solis BioDyne的高分辨率熔解曲线分析专用PCR试剂：
08-33-00001 5x HOT FIREPol EvaGreen HRM Mix（ROX）
08-31-00001 5x HOT FIREPol EvaGreen HRM Mix（without ROX）
2
飞行时间质谱分析，有它就够了
飞行时间质谱平台（MALDI-TOF）作为国际通用的基因单核苷酸多态性（SNP）的研究平台，对于SNP分型具有重要应用价值。
质谱SNP分型技术即是将PCR技术与质谱相结合，利用质谱分析对质量灵敏度高的特点，对待检SNP实现高精度分型，其原理是首先通过PCR引物对含待检SNP的目标片段进行扩增，PCR结束后加入虾碱性磷酸酶(SAP)去除反应液中的dNTP。
然后在反应液中加入SNP延伸引物及ddNTP等相关组分并进行单碱基延伸反应，反应过程中SNP延伸引物可与待测SNP的5′端序列结合并延伸一个碱基，根据不同的SNP模板可得到不同的延伸产物。
该步骤完成后，反应液与树脂混合进行离子交换用于去除液体中吸附于DNA片段上的K＋、Na＋、Mg2＋等离子，防止其干扰质谱检测结果。最后，反应液与基质在靶板上结晶，进行质谱检测并得到图谱。
由于各延伸产物分子量不同，因此可以在各自的分子量位置查看是否出现检测峰，然后判断该样品的SNP分型。
这里推荐Solis BioDyne的TERMIPol DNA Polymerase专用于质谱SNP的单核苷酸延伸：
01-03-00500 TERMIPol DNA Polymerase
01-06-00500 HOT TERMIPol DNA Polymerase
3
去泛素化酶——泛素羧基末端水解酶家族
UCHs（ubiquitin C-terminal hydrolases）属于半胱氨酸蛋白酶。通常是小分子蛋白，已发现UCHL-1、-2、-3、-4、-5等分子。它们作用的底物通常也是一些分子量较小的多肽。
UCHs可以通过裂解C末端76位甘氨酸，将泛素分子从小的多肽底物上释放出来。UCHs活性位点上的狭窄裂隙和环状结构直径的限制在一定程度上起到了特异性识别底物的功能，阻止了它对一些大分子泛素化蛋白的结合和催化。
这里推荐LifeSensors的UCHs系列：
cat#DB104 UCH-L1 UCH-L1对神经元以及弥散神经内分泌系统的细胞及其肿瘤具有高度特异性，占大脑总蛋白的> 1％，但其他组织几乎不存在。DB104可用于裂解Ub-AMC。
cat#DB101 UCH-L3 可裂解Ub-AMC, Ub-Rhodamine 110以及多种泛素修饰的多肽；对双泛素底物没有活性
cat#DB103 BAP1 通过介导组蛋白H2A和HCFC1的去泛素化在染色质中起关键作用， 可充当细胞生长的调节剂。DB103可用于裂解Ub-AMC。
4
去泛素化酶——泛素特异性加工酶家族
USPs(ubiquitin-specific proteases)家族是目前已知的去泛素化酶中成员最多，且结构最具多样性的一类，亦属半胱氨酸蛋白酶，包括Ubp-M、UBP41、UBP4、HAUSP、ISOT1等。
这些酶分子都含有两个短而保守的片段即赖氨酸盒和组氨酸盒，序列中具有起催化作用的三联残基，即半胱氨酸、组氨酸、天冬氨酸/天冬酰胺，能将泛素分子从大的蛋白上移除。
这里推荐LifeSensors的USPs系列：
cat#DB513 USP15 与COP9信号复合体相关，参与调节多种信号通路，例如TGF-β受体信号传导，NFκB和RNF41 / NRDP1-PRKN信号通路。DB513可以在Ub-CHOP报告系统中发挥酶活。
cat#DB503 USP8core 已证明USP8在受体酪氨酸激酶的稳定性中起关键作用，USP8core只包含USP8蛋白的核心结构域。DB503可以在Ub-CHOP报告系统中发挥酶活
cat#DB530 USP30 USP30定位在线粒体外膜，是一种半胱氨酸蛋白酶。研究表明USP30参与了细胞内线粒体形态的调控。后续研究发现USP30可以使PARK2以及PINK1驱动的线粒体自噬被逆转。USP30作为去泛素化酶可以去除泛素标签从而抑制线粒体自噬。USP30对磷酸化泛素的裂解效率较低。
5
去泛素化酶——卵巢肿瘤相关蛋白酶
OTUs（ovarian tumor-related proteases）是新近发现的一个去泛素化酶家族。它包括从酵母到哺乳动物高度保守的OTU结构域，含有约130aa，在氨基酸序列上与其他家族的去泛素化酶不同，但也具有三联催化活性位点（Cys，His，Asp）组成的核心结构域，与USP家族蛋白有很大相似性。
其中OTU1是在体外首先被证实的具有去泛素化酶活性的OTU蛋白。近年来研究表明，OTU1在细胞内具有多功能特性，除了参与蛋白质泛素化的调节外，还在调控细胞分化及细胞增生方面发挥重要作用。
这里推荐LifeSensors的OTUs系列：
cat#DB201 OTUB1 可在体外切割K48和K63连接的泛素链
cat#DB206 OTULIN 对线性泛素链（M1）具有高特异性,与HOIP（RNF31）结合，并调节其活性，从而影响NFκB调节的途径和促炎反应。
6
去泛素化酶——MJD去泛素化酶
MJD(Machado-joseph)的疾病相关蛋白Ataxin-3被研究得较为清楚，它是与神经退化紊乱相关的蛋白。人类的Josephin家族蛋白有4个，它们的结构类似于UCH去泛素化酶家族，分别是Ataxin-3、Ataxin-3L、Josephin-1和Josephin2。
其中的Ataxin-3是个半胱氨酸蛋白酶，它可以结合K48、K63方式连接的泛素链，但是对K63方式连接的泛素链更特异。Ataxin-3和Ataxin3L在氨基酸序列上是85%同源的，以相似的方式折叠，但结合Ub的方式却大不同。
这里推荐LifeSensors的MJDs系列：
cat#DB401 Ataxin-3 在体外裂解K48连接的泛素链
cat#DB404 JOSD2 裂解K63连接的泛素链，对K48连接的泛素链裂解效率较低。可在Ub-CHOP报告系统中发挥酶活。
7
去泛素化酶——JAMM蛋白酶家族
JAMM（Jab1/MPN domain associated metalloisopeptidase）,这一类去泛素化酶的代表是POH1，酵母细胞中的同源物称为Rpn 11，这是一类能结合泛素化蛋白上泛素分子的金属蛋白酶，具有MPN序列，或称JAMM序列，这一序列含有较为保守的两个组氟酸残基和一个天冬氯酸残基，它们与二价锌离子共同构成催化中心。
这里推荐LifeSensors的JAMM系列：
cat#DB301 AMSH 体外裂解K63连接的泛素链
cat#DB302 MSHcore 体外裂解K63连接的泛素链
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