含沙棘油牙膏的抗炎止血及修复功效研究

摘 要：研究含沙棘油牙膏的稳定性、体内抗炎和止血功效、体外修复效果，采用小鼠耳肿胀实验、兔肝脏止血实验、人牙龈成纤维细胞修复实验评估其体内抗炎和止血功效、体外修复功效。结果表明， 沙棘油牙膏符合国标GB8372的要求，具有较好的体内抗炎和止血、体外修复的效果。

关键词：牙膏；沙棘油；抗炎；止血；损伤修复，

正文：

1977年我 国卫生部首次将沙棘正式列入《中国药典 》，并定为药食同源植物。沙棘的籽、果皮、果实及果渣中都含有一定量的油脂 ，研究发现沙棘油中含有人体必需的多种营养活性成分，其中维生素E、胡萝卜素、植物甾醇、微量元素等为机体提供营养物质 ，有利于机体正常代谢；油酸甘油醋、脂肪酸等具有组织恢复的作用，可促使组织再生和溃疡愈合，其他活性组分具有抗菌、抗病毒、抗肿瘤、抗溃疡 、抗氧化、抗辐射、增强免疫力等功效 。

沙棘油因其安全性 、功效性在医药及保健食品领域应用比较成熟。如有文献报道沙棘油对醋酸法和慢性利血平法所致的大鼠胃溃疡模型有良好的促进愈合作用，可用于胃保健食品 ，但其在口腔护理产品中的应用不多，随着国人对口腔健康卫生要求的提高 ，功效型口腔产品也日益受消费者青睐。

笔者重点对沙棘油在牙膏中的应用及稳定性进行分析考察，同时对含沙棘油牙膏的体内抗炎和止血功效 、体外修复功效进行了验证。

1实验部分

1.1试剂与仪器

超临界沙棘油提取物，广州合诚三先生物科技有限公司 ；牙膏用原料；伤口愈合插件 (25 个每盒装 )，德国 ibidi公司 ；高糖型DMEM，胎牛血清FBS，青霉素，链霉素，磷酸盐缓冲液 (PBS)，美国Gibico公司；去离子水，自制；30 g·L 戊巴比妥钠 ，上海倍卓生物科技有限公司。

ROSS制膏机 ，罗斯 (无锡 )设备有限公司 ；生化培养箱 ，上海博迅医疗生物仪器股份有限公司；超纯水机 ，成都超纯科技有限公司；厌氧微好氧系统 ，广州雷得生物技术有限公司 ；酶标仪 ，帝肯(上海 )贸易有限公司；显微镜 ，奥林巴斯 (中国 )有限公司；台式冷冻离心机 ，赛默飞世尔科技(中国 )有限公司。

1.2 实验方法

1.2.1 含沙棘油牙膏的制备

采用常规牙膏生产工艺 ，对表1所述配方进行制膏 。

1.2.2稳定性实验

将1.2.1制备的含沙棘油 (质量分数为0.5％)牙膏分别置 于高温 (45 ℃)、常温条件存放。沙棘油的主要成分为脂肪酸 ，对稳定考察期牙膏进行脂肪酸气相色谱分析，用外标法计算膏体中沙棘油含量，其他指标按照牙膏标准GB8372要求进行3个月稳定性观察实验。

1.2.3 小鼠耳肿胀实验

KM小鼠96支，雄性，14~16g，按质量随机分为4组：阴性对照组、沙棘油（质量分数0.5%）牙膏组、不含沙棘油牙膏组和市售抗炎牙膏（阳性对照组）。小鼠检疫3~5d质量达到18~22g后开始实验，每组老鼠的左耳不做处理，右耳两面共涂二甲苯40ul，致炎0.5h后，阴性对照组右耳采用二甲苯处理，其他三组右耳两面分别涂抹对应样品0.1g，1h后脱颈处死，擦净样品，剪下双耳，打孔（左右耳同一部位）称量（精确到0.0001g）记录。同一只动物左右耳质量差即为肿胀值；阴性对照组肿胀值与样品肿胀值之差与阴性对照组肿胀值比值即为肿胀抑制率。采用统计学检验方法，计算相应的方差数据。

1.2.4 兔肝脏止血实验

检疫5d合格后的新西兰白兔60只，雄性。2.0~2.5kg，按质量随机分为4组：空白对照组，含沙棘油（质量分数为0.5%）牙膏、不含沙棘油牙膏和市售止血牙膏做阳性对照组。兔建议后用30gl戊巴比妥钠30mg/kg经耳缘静脉缓慢注入，麻醉成功后，逐层开腹暴露肝脏，在每只动物的相同部位肝左叶下缘钳夹1cm*1cm*3mm的创面。待血液充满创面后，空白对照组伤口不涂受试样品，其他3组伤口分用将1g对应样品敷涂在整个创面 ，用纱布覆盖 ，以50g 砝码在纱布上加压 ，观察止血效果。每隔30s观察伤口流血情况 ，用滤纸条轻轻蘸吸直至血液不再渗出，即滤纸条上不 再沾有血液为止 ，记录所需时间即止血时间。确定受试样品的止血效果后结束实验 ，逐层关闭切口。采用统计学检验方 法 ，计算相应的方差数据。

1.2.5 HGF-1细胞修复实验

制备含体积分数为5％的青霉素和链霉素混合液 (稀释浓度为100units／mL及 100t~g／mC)的高糖型DMEM培养基。实验分为4组：模型对照组、不含沙棘油的牙膏组、含沙棘油 (质量分数为0.5％ )牙膏组和阳性对照组。

选用对数生长期人牙龈成纤维细胞HGF-1进行培养，消化收集细胞后加入含有20％ (体积分数 )胎牛血清PBS的高糖型DMEM 培养基中制成细胞悬浮液，接种置于35mm小皿的伤口愈合插件小件中，70uL孔。37℃、体积分数5％的CO2培养箱培养细胞24h至完全铺满板底。用镊子垂直去除小件，PBS冲洗孔板一次以去除漂浮的细胞和细胞残骸 。模型对照组加入2mL不含胎牛血清PBS的高糖型DMEM培养基 ，阳性对照组加入2mL含体积分数为20％胎牛血清 PBS的高糖型DMEM培养基，其他两组分别加入对应样品稀释10000倍的西百瑞牙膏浆液 (沙棘油质量浓度为0.5ug／mL)2mL，取0h、48h时间点进行拍照。

2 结果与讨论

2.1 稳定性

含沙棘油牙膏稳定性实验结果见表2。由表2可知，膏体外观、香味、pH、稳定性等理化指标满足牙膏标准GB8372的要求 ，沙棘油含量检测、稠度指标均没有发生明显变化。

2.2 对小鼠耳肿胀的影响

含沙棘油牙膏的小鼠耳肿胀实验结果见表3。从表3可知，与阴性对照组比较 ，不含沙棘油的普通牙膏能降低小鼠肿胀值，两者无显著性差异；含沙棘油牙膏、阳性对照牙膏均能明显降低肿胀值，且有显著性差异 (P<0.05)；与阳性 对照组肿胀抑制率60.86％比较，含沙棘油牙膏肿胀抑制率为61.35％，两者无显著性差异 (P>0.05)，西百瑞含沙棘油的牙膏具有抗炎功能。

2.3 对兔肝脏止血的影响

含沙棘油牙膏的兔肝脏止血实验结果见表4。从表4可知，与空白对照组比较 ，含沙棘油牙膏止血时间明显缩短，且有显著性差异 (P<0.05)，含沙棘油的牙膏具有一定的止血效果。

2.4 对 HGF-1细胞损伤修复的影响

含沙棘油牙膏对 HGF-1细胞损伤修复的实验结果见图1所 示 。从图1可知 ，模型对照组 、不含沙棘油牙膏组细胞培养48h后细胞有少量迁移 ，且细胞难 以维持长梭形 ，皱缩变圆的细胞较多 。含沙棘油牙膏组和阳性对照组在培养48h后细胞有较多迁移，形态保持较好 ， 两者无显著差异 ，说明含沙棘油牙膏对人牙龈成纤维细胞迁移有较强促进作用 ，对口腔创口愈合有积极的促进作用 。

3 结论

通过对制备的含沙棘油 (质量分数为0.5％)牙膏进行高温 (45℃)、常温存放稳定性考察可知含沙棘油牙膏各项 指标均符合牙膏标准GB8372要求，对含沙棘油牙膏进行的小鼠耳肿胀实验 、兔肝脏止血实验、人牙龈成纤维细胞损伤 修复实验可知 ，含沙棘油的牙膏具有体内抗炎和止血功效 、 体外修复功效。

作者简介 ：李立芬 (1986-)，女，湖南人，工程师，硕士。摘选《科技广场》2018年1月。

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