黑木耳是一种非常鲜美的胶质食用菌，不仅具有极高的食用价值且还有一定的药用价值，同时黑木耳肉质鲜美细腻，吃起来脆滑爽口，深受大家的喜爱与追捧。如今种植黑木耳的人也不占少数，但是种植黑木耳并不简单，而且还有很多技术在里面，需要学习，今天我们就来说说黑木耳的母种分离培养是如何操作的？首先要了解母种就是从担孢子（菌体组织）直接分离培养获得的母种或引进的菌种。
母种的转接与培养
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选择配方→按方称料→溶解→调pH值→过滤澄清→分装→塞棉塞→包扎→灭菌→摆斜面→检验。1支母种(25~28℃,7天)→30~40支(25~28℃,7~14天)→再转扩→(30~40)×(30~40)→用于原种生产。
(1)原种的孢子分离和耳木分离方法：①将现场采下的种耳用冷开水浸两小时，并冲洗3~4次，放入灭菌培养皿或搪瓷盘内，盖上无菌纱布，收尽耳面余水，再用灭菌剪刀将本耳剪成蚕豆大小的耳片。用灭过菌的接种铲挑取一小块种耳，迅速地移入试管，并贴在事先涂放少许培养基的试管壁上种耳长孢子的一面朝向斜面培养基。于18~20℃下培养24小时，当斜面上有孢子印时用。
②耳木的选择关系到分离是否成功及菌种质量的好坏。要选择出耳早，耳片生长稀密适中或呈菊花状、色黑、朵大、肉厚、质量好、无杂菌的第一年或第二年的耳棒，将最好的一段锯下，充分晾干，并在准备分离的部位做好记号。分离时从该处锯下1厘米左右去皮的薄片，带入接种箱，以挤干后的酒精棉花消毒表面，用无菌解剖刀切去吸有酒精的表层，在菌丝蔓延的部位将菌材切成火柴梗大小，用无菌镊子取一根放入斜面培养基中部。
如果用培养皿平板分离，每一平板可放4根。然后放在2830℃下培养2~3天，就可看到白色绒毛状、生长缓慢的木耳菌丝。如果在24小时左右就长出菌丝，而且生长很快，通常都是杂菌菌丝，耳木分离的菌丝经过1~2次提纯，即可作为原种。
(2)培养基的配制：①母种培养基配方马铃薯200克、葡萄糖20克、蛋白胨10克、硫酸镁1.5克、磷酸二氢钾3克、水1000毫升。
②配制方法首先把马铃薯削皮、切片、水煮，八分熟后取其汁液，小火加热，放入蛋白胨、葡萄糖、磷酸二氢钾。溶化后将培养基装入规格为500毫升的三角瓶中，装入高度在250毫升左右。再把分装后的三角瓶塞紧瓶口，最后用立式高压灭菌锅灭菌在1.2个压力下(锅内温度121℃)灭菌40分钟，待温度降低至60℃时取出。
(3)黑木耳新菌株的分离与扩大培养在超净工作台上进行组织分离。用75%酒精棉球擦拭双手及接种工具，点燃酒精灯，将剪子烧灼灭菌。随后将选育出来的黑木耳边缘四周剪掉，剪取远离耳基无筋的最平部位的耳片，取长0.5厘米、宽0.2厘米左右的组织块，迅速接到试管中，塞上棉塞。这些操作必须在无菌区域进行。分离后的试管在25℃左右的环境中进行暗光培养。
2~3天后在试管斜面上长出白色的绒毛状菌丝，经常检查污染情况，如发现青、绿、黄、黑等颜色的小点及糊状物，说明试管已污染，要及时淘汰。经过15天左右的培养，菌丝可长满斜面，即得到母种，将其放入2~4℃冰箱中保存备用如果直接用于接种栽培种，不但成本高而且数量有限，难以满足生产用种的需要量。为此，必须将母种进行扩大繁殖。首先选择优良的标准的试管母种，再转2~3次，以增加母种数量。这种母种称为再生母种。
转管次数不宜过多，否则会降低菌种的生活力，容易衰老退化；同时在转管扩大繁殖中应避免杂菌和虫害的污染，以保证菌种的纯度。将接种后的试管母种置于25℃左右的恒温培养箱中，培养2~3天后，逐管检查菌丝是否发菌定植(接种块上有无新生菌丝);同时检查有无杂菌污染。若在接种块上或斜面培养基表面产生独立小菌落霉菌或奶油状小点的细菌，均应立即剔除。纯洁的菌种经过7~15天的培养，母种菌丝即可长满斜面培养基。
2.母种检验、保藏与使用：(1)母种检验在培养过程中，按照品种原有特征，每天观察，淘汰污染，最后保留生长旺盛、菌丝体健壮、无污染、不老化的作为母种，保藏或使用。
(2)母种保存方法(常用)：斜面冰箱保存：0~4℃保存2~4个月后转扩一次，应常换培养基配方。
树枝保存法：可保存1~3年。保存后菌种的作用：保存后→转扩→枝条切成细条→转入斜面→萌发→线段菌丝→再转→试管且无污染→生产上可用。
(3)母种使用按1支母种接5~8瓶原种，无菌操作，将菌丝体连带培养基全部转人原种培养基中，在适宜条件下培养。
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