广东
牛结核病γ-干扰素ELISA检测试剂盒
牛结核病与γ-干扰素检测基本介绍
牛结核病是由牛分枝杆菌感染引发的慢性消耗性人兽共患病，被我国列为二类动物疫病，同时属于世界动物卫生组织（WOAH）法定报告动物疫病。牛分枝杆菌可感染牛、鹿等家畜，也可通过呼吸道、消化道传播给人类（尤其是饮用未消毒的生牛乳人群），危害公共卫生安全。
牛结核病γ-干扰素检测是国际公认的牛结核病诊断金标准方法之一，其核心原理是利用牛感染牛分枝杆菌后，体内致敏T细胞再次接触结核特异性抗原时会分泌γ-干扰素（IFN-γ）的特性，通过定量检测γ-干扰素水平判断是否存在感染，相比传统结核菌素皮试特异性更高、操作更简便，适合大规模牛群筛查。
二、牛结核病γ-干扰素ELISA检测试剂盒检测原理
该试剂盒基于夹心ELISA法定量检测牛全血培养上清中的γ-干扰素浓度，核心流程与原理如下：
全血预培养：将待检牛的新鲜抗凝血分别加入3个培养管：阴性对照管（不加刺激原）、阳性对照管（加非特异性丝裂原，如植物血凝素PHA，验证淋巴细胞活性）、特异性刺激管（加牛分枝杆菌特异性抗原，如ESAT-6、CFP-10，仅被结核致敏T细胞识别），37℃培养16~24小时。若牛感染牛分枝杆菌，特异性刺激管中的致敏T细胞会被激活并分泌γ-干扰素到上清中。
预包被：试剂盒酶标板微孔预先包被了针对牛γ-干扰素的单克隆抗体（捕获抗体），可特异性结合上清中的γ-干扰素。
夹心反应：取各培养管的上清加入对应微孔中，上清中的γ-干扰素会与板上的捕获抗体结合；洗去未结合物质后，加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的另一种抗牛γ-干扰素单克隆抗体（检测抗体），形成“捕获抗体-γ-干扰素-酶标检测抗体”的三明治复合物。
显色判读：加入TMB底物显色，颜色深浅与上清中γ-干扰素浓度正相关；用酶标仪测定OD值，通过标准曲线计算γ-干扰素浓度，最终判定结果：
若阳性对照管γ-干扰素浓度≥阈值，说明淋巴细胞功能正常，检测有效；
若特异性刺激管γ-干扰素浓度减去阴性对照管浓度≥试剂盒临界值，判定为阳性，提示牛存在牛分枝杆菌感染。
该方法特异性可达95%以上，可区分卡介苗（BCG）免疫与野毒感染（基于ESAT-6、CFP-10抗原为卡介苗缺失基因编码），是牛结核病净化的核心检测技术。
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