FITC标记人血清白蛋白(全称异硫氰酸荧光素标记人血清白蛋白,英文缩写FITC-HSA)是应用非常广泛的绿色荧光标记科研工具,结合了FITC的荧光示踪能力与人血清白蛋白的天然生物学特性。
基础结构与制备原理
FITC-HSA是将异硫氰酸荧光素(FITC)通过共价键偶联到人血清白蛋白(HSA)分子上得到的荧光标记蛋白,仅用于科学研究,不可用于临床治疗或人体应用。
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FITC-HSA,FITC标记人血清白蛋白
- 结构与分子量
- 荧光端:FITC通过异硫氰酸基团与HSA表面赖氨酸残基的伯氨基反应,形成稳定共价键,每个HSA分子通常标记3-8个FITC分子,平衡荧光强度与蛋白溶解性;
- 蛋白端:HSA是人血浆中含量最丰富的天然蛋白,由585个氨基酸残基组成,本体分子量约66.5-67kDa,保留天然水溶性、结合能力和生物相容性;
- 制备工艺: 典型标记反应在pH9.0-9.5的碱性碳酸盐缓冲体系中进行,控制FITC与HSA的摩尔比为5-10:1,反应完成后通过凝胶过滤色谱或透析彻底去除游离未结合的FITC,这一步是避免背景荧光干扰的关键,最终通过纯度、标记率验证得到成品。
- 外观与溶解性:一般为黄色至黄绿色冻干粉或溶液,易溶于水、PBS缓冲液、Tris缓冲液等常见生化试剂。
特性
- 光学适配性强:FITC最大激发波长约490-495nm,最大发射波长约515-525nm,呈现明亮的黄绿色荧光,完全适配荧光显微镜、共聚焦显微镜、流式细胞仪、荧光酶标仪等常规实验室设备,直接使用标准FITC滤光片组即可检测,无需特殊配件。
- 生物相容性优异:HSA是人体天然存在的蛋白,低免疫原性、稳定性高,标记后保留HSA与小分子、金属离子、激素、药物结合的天然能力,适合模拟体内蛋白转运过程。
- 性质稳定:共价偶联牢固,游离染料残留少,低温避光保存条件下可稳定存放1年以上,仅FITC本身存在一定光敏性,实验操作需要注意避光。
- 适配多标记实验:FITC的绿色荧光通道与Cy3(橙红)、Cy5(近红外)、DAPI(蓝色)完全区分,可搭配其他荧光探针做多通道共定位成像,无明显信号串色。
使用与保存注意事项
- 密封避光保存在-20℃干燥环境,建议分装储存,避免反复冻融,反复冻融和吸潮会导致蛋白聚集和荧光淬灭;
- 从冰箱取出后需回温至室温再开盖,避免水汽进入导致吸潮结块;
- FITC存在光敏性,配制工作液和实验操作过程中尽量避光,现配现用,剩余工作液避光冻存,避免长时间强光照射;
- 本产品仅用于体外科研实验,禁止用于人体临床治疗、食品或化妆品生产。
温馨提示:供应产品仅用于科研,不能用于人体!
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