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人可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(sTRAIL)ELISA KIT说明书

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人可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(sTRAIL)ELISA KIT

作者:深圳市恒昊生物科技有限公司

什么是人sTRAIL ELISA Kit?

TRAIL是肿瘤坏死因子(TNF)超家族的成员,天然状态下主要以跨膜蛋白形式表达于免疫细胞(如T细胞、NK细胞)表面,跨膜TRAIL可以被蛋白酶剪切释放到细胞外基质和体液中,形成可溶性的sTRAIL。sTRAIL保留了完整的生物学活性,能够特异性结合肿瘤细胞表面的死亡受体(DR4、DR5),启动凋亡信号通路,诱导肿瘤细胞凋亡,而对正常细胞几乎无毒性,是肿瘤免疫调控研究中极具潜力的分子标志物。

人sTRAIL ELISA Kit是专门用于定量检测人血清、血浆、细胞培养上清、组织匀浆等生物样本中可溶性sTRAIL浓度的商用酶联免疫吸附试剂盒,通过抗原抗体特异性结合的原理实现精准定量,对比免疫印迹、流式细胞术等检测方法相比,具备操作简便、通量高、可实现绝对定量、对样本需求量低的优势,适合大样本量的临床样本筛查与基础科研检测场景。

注意事项



为获得准确、可重复的检测结果,操作过程中需注意以下关键环节:

(一)样本采集与保存

  1. 不同类型样本处理规范:
  • 血清样本:采集全血后室温静置30分钟使其自然凝固,2~8℃下1000g离心15分钟分离上层血清,若无法及时检测需分装后置于-20℃或-80℃保存,避免反复冻融,反复冻融会导致sTRAIL蛋白降解,造成检测值偏低。
  • 血浆样本:推荐使用EDTA、肝素作为抗凝剂,禁止使用柠檬酸钠、EDTA-K2等可能影响抗原结合的抗凝剂,采集后1小时内离心分离血浆,保存方式同血清。
  • 细胞培养上清:收集上清后3000g离心10分钟去除细胞碎片和沉淀,取上清检测;若样本中细胞碎片较多,可再次离心取上清,避免杂质干扰反应。
  • 组织匀浆:取适量组织样本加入预冷的PBS(pH7.2-7.4)充分研磨,离心后取上清检测,避免组织残留导致非特异性结合。
若待测样本中sTRAIL浓度超出试剂盒检测上限,需使用试剂盒提供的样本稀释液按比例稀释后再检测,避免出现“钩状效应”导致结果假性偏低。

(二)试剂准备规范

  1. 试剂盒从2~8℃取出后,需在室温(20~25℃)平衡至少30分钟,确保试剂温度均一,否则会影响抗原抗体结合效率,导致标准曲线偏移。未用完的试剂需及时放回2~8℃保存,生物素标记抗体、酶标试剂需避光保存。
  2. 浓缩洗涤液需用去离子水或双蒸水按说明书比例稀释,若低温下洗涤液出现结晶时,需提前37℃水浴溶解结晶后再稀释,避免盐浓度异常影响洗涤效果。
  3. sTRAIL标准品需现用现配,不要提前配制后放置,避免蛋白降解导致标准曲线不准确

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