牛！5天就接受-1区~参附注射液通过双重抑制内皮细胞焦亡改善脓毒症相关性肝损伤的凝血障碍

【写在前面】：本期推荐的是由滨州医科大学烟台附属医院消化内科、上海交通大学医学院瑞金医院重症监护科等研究团队合作近期发表于Phytomedicine(IF11.3）的一篇文章，揭示参附注射液通过双重抑制内皮细胞焦亡改善脓毒症相关性肝损伤的凝血障碍。

【期刊简介】

【题目及作者信息】

Shenfu injection ameliorates coagulopathy in sepsis-associated liver injury via dual inhibition of endothelial cell pyroptosis

背景

脓毒症相关肝损伤（SALI）是导致脓毒症患者高死亡率的关键因素，其特征是严重的凝血障碍。血管内皮细胞（EC）在脓毒症的凝血障碍中起着关键作用。参附注射液（SFI）是一种中药，广泛应用于脓毒症治疗，但其对SALI中EC活化和凝血障碍的影响尚未得到充分探索。

目标

本研究旨在阐明SFI缓解与SALI相关的EC活化和凝血障碍的机制，并分析SFI中单个化合物在调节EC凝血活化中的作用。

方法

对接受或不接受SFI治疗的败血症患者的凝血和肝损伤相关生物标志物的血浆水平进行了分析。通过腹腔注射LPS建立脓毒症小鼠模型，用于研究SFI的体内药理作用。以LPS刺激的人脐静脉内皮细胞（HUVEC）作为脓毒症诱导EC活化的体外模型。进行转录组测序以研究SFI调节EC激活的分子机制。透射电子显微镜和共聚焦激光显微镜用于评估HUVEC中的焦亡和LPS内化。

结果

临床数据显示，与非SFI治疗组相比，SFI治疗的败血症患者的凝血标志物和肝损伤相关指标显著降低。在小鼠模型中，SFI给药减轻了肝损伤和炎症反应。SFI治疗的脓毒症小鼠的组织因子（TF）和纤溶酶原激活物抑制剂-1（PAI-1）的血浆水平以及肝组织中纤维蛋白原的积累也降低了。从机制上讲，SFI诱导AMPK的磷酸化依赖性激活，从而导致RIPK2的去磷酸化，从而阻断NLRP3介导的典型焦亡。此外，SFI通过阻断HMGB1/RAGE轴和抑制LPS结合蛋白（LBP）的表达来抑制LPS内化，从而抑制非典型焦亡。此外，网络药理学和分子对接分析强调，SFI中的人参皂苷Rb1和人参皂苷Re分别与AMPK和LBP具有很强的结合亲和力，支持SFI对焦亡的双重抑制作用。

结论

我们的研究结果揭示了SFI通过双重抑制焦亡来治疗败血症相关凝血病和肝损伤的意义，为SFI的临床应用提供了理论依据。

图文摘要

【前言】

参附注射液（SFI）源自传统方剂参附汤，是一种现代中药制剂。它由人参和乌头的水提取物配制而成，人参皂苷和乌头生物碱被确定为其主要生物活性成分。人参皂苷以其免疫调节、抗氧化和抗炎特性而闻名，而乌头生物碱在增强微循环和心血管功能方面起着至关重要的作用。SFI已被广泛用于治疗严重的临床疾病，包括败血症和感染性休克、心力衰竭和脑血管疾病，显示出显著的免疫调节作用。先前的研究表明，SFI可以改善微循环灌注，预防脓毒症内皮功能障碍，主要是通过抑制PI3K/Akt介导的糖酵解。此外，SFI已显示出减轻缺血/再灌注相关肝损伤的潜力，表明其对肝脏稳态的有益作用。尽管SFI在改善脓毒症相关肝损伤（SALI）方面有很好的疗效，但SFI在这种情况下解决凝血障碍的具体机制在很大程度上仍未得到探索。鉴于这一背景，SFI为脓毒症及其并发症的临床管理提供了一条令人信服的进一步研究途径，因为了解其化学成分和作用机制将为其在实践中的应用提供坚实的理论基础。

据报道，热解是一种促炎形式的程序性细胞死亡，是脓毒症诱导的急性肝损伤的关键机制。微生物感染激活细胞质中的胱天蛋白酶（胱天蛋白酶1、4、5和11），导致气皮蛋白D（GSDMD）裂解，产生形成膜孔的GSDMD-N末端，引发焦亡和炎症因子的释放。据报道，焦亡可以通过GSDMD介导的组织因子活性的增加来促进凝血，组织因子是凝血的关键引发因素。

在这项研究中，我们展示了SFI在调节SALI中EC凝血激活方面的新机制。具体而言，我们发现SFI抑制胱天蛋白酶1介导的典型焦亡和胱天蛋白酶4介导的非典型焦亡。SFI对焦亡的抑制有效地缓解了EC功能障碍和凝血障碍，从而改善了SALI。这些发现揭示了对SFI改善脓毒症相关凝血障碍和肝损伤机制的新认识，为SFI在脓毒症中的临床应用提供了新的理论依据。

【结果部分】

1.参附注射液的LC-qTOF-MS色谱图。

2.SFI减轻脓毒症患者的凝血障碍和肝损伤。

3.SFI抑制HUVEC的典型和非典型焦亡。

4.SFI通过阻断焦亡减轻EC凝血激活。

5.SFI通过调节AMPK/RIPK2信号抑制典型焦亡。

6.SFI通过抑制HUVEC中LPS内化阻断非典型焦亡介导的凝血激活。

7.SFI改善脓毒症小鼠的凝血激活和肝损伤。

8.SFI化合物的化学结构和分子对接。

9.SFI化合物人参皂苷Rb1或Re对AMPK/RIPK2/NLRP3介导的典型焦亡和LBP介导的非典型焦亡具有疗效。

10.机制图：参附注射液抑制AMPK/RIPK2/NLRP3驱动的典型焦亡和LBP/HMGB1介导的LPS内化相关的非典型焦亡，从而缓解脓毒症相关性肝损伤中的EC凝血病。

【结论与讨论】

总的来说，我们证明了SFI在调节SALI中EC焦亡相关凝血激活方面的新机制。对于典型焦亡，SFI通过诱导AMPK激活来抑制RIPK2磷酸化，从而阻断GSDMD的胱天蛋白酶1-依赖性切割。对于非规范性焦亡，SFI通过抑制ECs中LBP/CD14的表达来阻断LPS内化，从而抑制胱天蛋白酶4/5/11介导的GSDMD-N孔形成。我们的研究结果强调了SFI治疗SALI相关内皮功能障碍的治疗潜力，并强调焦亡是脓毒症相关凝血病的一个有前景的治疗靶点，为SFI在脓毒症中的临床应用提供了有价值的证据。

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