J Ethnopharmacol I 经典名方当归芍药散，如何“按下”MASH炎症开关？

2026年3月27日，上海中医药大学附属曙光医院肝病研究所冯琴、苟小军、胡义杨主任医师团队在Journal of Ethnopharmacology (IF=5.4，中科院2区，Q1，TOP期刊)在线发表题为“Danggui-Shaoyao-San ameliorates metabolic dysfunction-associated steatohepatitis via suppressing hepatic macrophage NLRP3 inflammasome”（当归芍药散通过抑制肝巨噬细胞NLRP3炎症小体改善代谢功能障碍相关性脂肪性肝炎）的研究论文。

亮点

•传统中药复方DGSY可缓解高脂高胆固醇饮食小鼠模型中的MASH症状。

•DGSY通过抑制肝巨噬细胞中的NLRP3炎症小体发挥作用。

•白术内酯 III 和没食子酸是抑制 DGSY 中 NLRP3 炎症小体的潜在活性成分。

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【摘要】

民族药理学相关性

当归芍药散（DGSY）是传统中医经典方剂，已被证实对治疗脂肪肝具有疗效。然而，其药理机制仍未得到充分阐明。

研究目的

本研究旨在阐明 DGSY 可能通过哪些分子机制参与调节 MASH 的进展。

材料与方法

本研究采用高脂高碳水化合物（HFHC）饮食建立小鼠MASH模型，随后用DGSY治疗以评估其疗效。采用RNA测序（RNA-Seq）、蛋白质印迹和免疫荧光等方法阐明DGSY治疗MASH的潜在机制。利用MASH小鼠模型和LPS+ATP刺激的骨髓来源巨噬细胞（BMDM）研究巨噬细胞中NLRP3炎症小体的激活情况。此外，通过体内NLRP3敲低和体外NLRP3敲除进一步验证了DGSY的作用机制。采用超高效液相色谱-四极杆-Orbitrap高分辨率质谱（UHPLC-Q-Orbitrap HRMS）分析鉴定DGSY的主要活性成分。

结果

DGSY能有效治疗高脂高胆固醇饮食诱导的MASH小鼠模型，显著减轻肝脏炎症。机制研究表明，DGSY的作用机制显著影响NOD样受体信号通路。MASH小鼠模型肝脏巨噬细胞和LPS+ATP刺激的BMDM中NLRP3、caspase-1和IL-1β的蛋白表达水平显著升高，而DGSY治疗可逆转这些升高。体内NLRP3敲低可减轻MASH，但会抵消DGSY的治疗作用。体内NLRP3敲低和体外NLRP3敲除均能消除DGSY对caspase-1活性和IL-1β释放的抑制作用。此外，UHPLC-Q-Orbitrap HRMS分析鉴定出DGSY中的四种主要活性成分，其中紫草内酯III和没食子酸能显著抑制NLRP3蛋白的表达。

结论

DGSY对MASH具有保护作用，其机制包括抑制肝巨噬细胞NLRP3炎症小体、抑制caspase-1活性以及减少IL-1β释放。本研究为DGSY在MASH治疗中的临床应用提供了实验证据。

图文摘要 当归芍药散通过抑制肝巨噬细胞NLRP3炎症小体来改善代谢功能障碍相关的脂肪性肝炎。

01

研究背景及科学问题

代谢功能障碍相关性脂肪肝（MASLD），曾被称为非酒精性脂肪性肝病，涵盖了从单纯性脂肪变性到代谢功能障碍相关性脂肪性肝炎（MASH）和纤维化的疾病连续谱（Rinella等，2023）。它已成为肝细胞癌（HCC）的主要病因之一（Talamantes等，2023）。全球约有38%的成年人患有MASLD，使其成为最常见的慢性肝病之一（Zelber-Sagi等，2024）。 MASLD 的发病机制很复杂（Loomba 等，2021），因此，药物治疗的目标多种多样（Tincopa 等，2024），联合治疗可能优于单一疗法（Lin 等，2024）。

传统中药（TCM）因其作用靶点广泛、疗效显著且毒性相对较低，在预防和治疗代谢相关疾病（MASH）方面展现出潜在的应用价值，并已获得广泛认可（Tao et al., 2024 ; Liu et al., 2024 ; Ji et al., 2022）。当归芍药散（DGSY）是源自《金房要略》的传统中药方剂，在中国广泛应用，已被证实对改善代谢相关疾病具有积极作用。该方剂以其疗效和安全性著称，已在世界各地应用数千年。在韩国，它通常被称为当归芍药散（Dangguijakyak-san），在日本则被称为时芍药散（Toki-shakuyaku-san，TJ-23）。其主要成分为苍术（Atractylodes macrocephala Koidz.）。 （白术、白术）、泽泻。 （泽泻、泽泻）、芍药。白芍、白芍、茯苓、茯苓、川芎。 （川芎，Chuanxiong Rhizoma）和Angelica sinensis (Oliv.) Diels（当归，Angelicae Sinensis Radix）。

现代药理学研究表明，DGSY能够降低斑马鱼高脂血症模型（Wang et al., 2023）和果糖喂养的代谢综合征小鼠模型（Yin et al., 2021）中的肝脏脂质蓄积。近期研究还表明，DGSY在脂多糖（LPS）诱导的神经炎症（Ding et al., 2018）和四氯化碳（CCl4）诱导的肝纤维化模型（Zhao et al., 2024）中具有抗炎作用。此外，DGSY还被发现能够改善认知功能障碍（Fu et al., 2015），具有抗抑郁特性（Xu et al., 2011），并具有抗氧化活性（Lan et al., 2012）。综上所述，这些发现表明DGSY可能成为现代医学的宝贵资源，值得进一步研究。

NOD样受体吡啶结构域蛋白3 (NLRP3) 炎症小体是一种兆道尔顿级复合物，与多种主要由炎症机制驱动的疾病密切相关（Cabral等，2025）。在肥胖和2型糖尿病的背景下，NLRP3炎症小体及其下游信号级联的激活被认为是导致和加剧这些代谢紊乱的重要因素（Meier等，2025）。值得注意的是，抑制NLRP3炎症小体的激活可以减轻MASH相关的炎症和纤维化，凸显了其作为该疾病潜在治疗靶点的价值（Chen等，2024；Babuta等，2024）。

越来越多的证据表明，DGSY在治疗MASH方面具有潜力（Cheng et al., 2022）。然而，DGSY在MASH中的治疗效果和药理机制仍需进一步全面系统的研究。因此，本研究构建了高脂高碳水化合物（HFHC）诱导的MASH小鼠模型、LPS+ATP诱导的巨噬细胞炎症模型以及RNA测序技术，以探讨DGSY在MASH治疗中的疗效及其潜在的药效学机制。

02

重要发现及亮点

DGSY可减轻高脂高胆固醇诱导的MASH小鼠的肝脏脂质沉积和炎症反应，并增强其葡萄糖代谢。

为了诱导MASH表型，小鼠连续24周喂食高脂高胆固醇（HFHC）饮食，结果显示其炎症反应比HFD饮食更为显著（Kumar等，2020）。为了进一步研究DGSY对MASH的影响，在研究的最后6周，分别给小鼠饮用添加低剂量（DGSY-L）、高剂量（DGSY-H）或不添加DGSY的饮用水（图1A）。观察小鼠的整体状况，包括实验结束时的体型（补充图1）和体重。与对照组相比，喂食HFHC饮食的小鼠体重、肝脏质量和体肝比均显著升高。DGSY治疗有效降低了这些指标（图1B -E）。油红O染色显示，喂食HFHC饮食的小鼠肝脏中存在广泛的脂质积累，而DGSY治疗减轻了这种积累（图1F）。 24周时，高脂高胆固醇（HFHC）喂养的小鼠肝脏甘油三酯（TG）水平显著升高，但DGSY治疗降低了TG水平（图1G）。此外，DGSY减轻了MASH小鼠的肝脏炎症，表现为ALT水平降低（图1H）和组织学特征改善（图1F），包括肝脂肪变性、气球样变性和小叶炎症的减少（图1I -L）。然而，天狼星红染色显示HFHC喂养的小鼠肝脏无明显纤维化（补充图2）。总而言之，这些结果表明DGSY对MASH小鼠的肝脏脂质代谢紊乱和炎症具有保护作用。

图1. DGSY给药显著改善了高脂高胆固醇（HFHC）喂养小鼠的肝脏炎症、脂质和葡萄糖代谢。(A)动物模型建立和给药方案示意图。(B)小鼠体重测量。 (CE)小鼠最终体重(C)、肝脏重量(D)和肝体重比(E)的测量结果。(F)肝脏外观，油红O染色和苏木精-伊红（H&E）染色。(G)肝脏甘油三酯（TG）含量。(H)血清丙氨酸氨基转移酶（ ALT）水平。(IL)肝组织切片的MASLD活动评分(I)、脂肪变性(J)、小叶炎症(K)和肝细胞气球样变性(L)。(MO)空腹血糖（FBG）水平。(M) 血清空腹胰岛素（FINS）水平。(N) HOMA-IR (O)。平均值±标准误，n=8。* p < 0.05，** p < 0.01；## p < 0.01，与HFHC组比较。

此外，与对照组相比，HFHC组的空腹血糖（FBG）、空腹胰岛素（FINS）和稳态模型胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）均显著升高（p < 0.01 或p < 0.05）。DGSY-L/H显著降低了HFHC饮食诱导的MASH小鼠的FINS和HOMA-IR水平，但对FBG无明显影响（图1 M-O）。综上所述，这些结果证实了DGSY在治疗MASH方面的潜在应用价值。

通过RNA测序分析，探讨DGSY治疗MASH的潜在药理机制，重点关注NOD样受体信号通路。

为了探究DGSY对MASH的潜在机制，我们对DGSY治疗的MASH小鼠肝脏样本进行了RNA测序分析。对两组样本转录组变化进行主成分分析（PCA）表明，两组样本具有高度可区分性（图2A）。结果显示，DGSY治疗后，肝脏中多个基因的表达发生显著变化（881个基因下调，284个基因上调）（p < 0.05）（图2B -D）。对差异表达基因（DEGs）进行京都基因与基因组百科全书（KEGG）通路分析发现，NOD样受体信号通路是富集通路之一，且排名较高（图2E）。此外，对差异表达基因（DEGs）（图2F ）进行基因集富集分析（GSEA）显示，与HFHC组相比，HFHC+DGSY-H组在NAFLD和NOD样受体信号通路基因集中表现出显著抑制（图2G -H）。以上分析结果支持NOD样受体信号通路在DGSY介导的作用中受到显著影响。

图2.通过RNA-seq分析聚焦NOD样受体信号通路。(A)主成分分析(PCA)。(B)差异表达基因(DEGs)数量。(C)火山图。(D)两组肝组织(每组n=4)中DEGs的热图。(E)转录组的京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析。(F)转录组的基因集富集分析(GSEA)。(G)非酒精性脂肪性肝病的基因集富集分析(GSEA)。(H) NOD样受体信号通路的基因集富集分析(GSEA)。

DGSY在体外和体内均能抑制肝巨噬细胞NLRP3蛋白、caspase1活化和IL-1β分泌。

NLRP3在MASH的NOD样受体信号通路中发挥关键作用，NLRP3/caspase1/IL-1β是经典的NLRP3炎症小体激活通路（Ramos-Tovar和Muriel，2023；Xu和Núñez，2023）。NLRP3主要存在于肝脏固有免疫细胞中，包括库普弗细胞、单核细胞来源的巨噬细胞和树突状细胞（Szabo和Csak，2012）。基于RNA-seq分析，我们进行了体内和体外实验。体内实验表明，DGSY处理显著降低了NLRP3的蛋白水平（图3 A-B）。NLRP3炎症小体信号通路的主要分子caspase1和IL-1β在DGSY处理后也出现下降（图3 C-G）。同时，DGSY 对 MASH 肝脏 NLRP3 活化的抑制作用得到了 NLRP3 与 F4/80 阳性巨噬细胞共定位减少的支持（图 3 H-I）。

图3. DGSY在体内抑制巨噬细胞NLRP3/caspase1/IL-1β轴。(A) WB检测小鼠肝组织样本中的NLRP3蛋白。(B)小鼠肝组织样本中NLRP3蛋白的定量分析。(C) WB检测小鼠肝组织样本中的caspase1、pro-caspase1、IL-1β和pro-IL-1β。(DG)小鼠肝组织样本中caspase1 (D)、IL-1β (E)、pro-caspase1 (F)和pro-IL-1β (G)的定量分析。(H)小鼠肝组织切片中NLRP3的免疫荧光(IF)。(I)小鼠肝组织切片中NLRP3荧光强度的定量分析。平均值±标准误，* p < 0.05，** p < 0.01，ns，无统计学意义。

炎症小体信号通路的激活主要通过以下两个步骤实现。在启动阶段，LPS上调NLRP3的表达。在刺激阶段，NLRP3复合物组装激活caspase-1，后者将前体IL-1β转化为成熟的IL-1β并释放到细胞外。本研究旨在利用体外培养的小鼠骨髓来源巨噬细胞（BMDM）探究DGSY对NLRP3炎症小体的直接作用。我们用LPS（100 ng/ml）（启动阶段）+ ATP（2.5 mM）（刺激阶段）处理BMDM，构建NLRP3激活模型，以评估DGSY的作用（图4A）。选择性NLRP3抑制剂MCC950已被证实能够阻断NLRP3的激活（Coll等，2015）。 Western blotting结果显示，LPS + ATP组中NLRP3、caspase1和IL-1β表达上调，而DGSY和MCC950处理后表达显著降低（图4 B-H）。为了确定DGSY是否通过调节巨噬细胞NLRP3来抑制MASH，我们采用免疫荧光法检测了F4/80标记的BMDM中NLRP3的表达，结果显示LPS + ATP组中NLRP3表达上调，而DGSY和MCC950组中NLRP3表达下调（图4 I-J）。综上所述，这些结果支持了DGSY抑制巨噬细胞NLRP3/caspase1/IL-1β轴的假设。

图4. DGSY在体外抑制巨噬细胞NLRP3/caspase1/IL-1β轴。(A) BMDM的提取和培养流程。(B) BMDM分别用DMSO、LPS (100 ng/ml) + ATP (2.5 mM)、LPS (100 ng/ml) + ATP (2.5 mM) + DGSY (1 mg/ml)、LPS (100 ng/ml) + ATP (2.5 mM) + DGSY (2 mg/ml)和LPS (100 ng/ml) + ATP (2.5 mM) + MCC950 (20 nM)处理。采用Western blot检测BMDM中NLRP3蛋白的表达。(C) BMDM中NLRP3蛋白的定量分析。(D)采用Western blot法检测BMDM细胞中caspase-1、pro-caspase-1、IL-1β和pro-IL-1β的表达。(EH)对BMDM细胞中caspase-1 (E)、IL-1β (F)、pro-caspase-1 (G)和pro-IL-1β (H)的表达进行定量分析。(I)用LPS (100 ng/ml) + ATP (2.5 mM)、LPS (100 ng/ml) + ATP (2.5 mM) + DGSY (1 mg/ml)、LPS (100 ng/ml) + ATP (2.5 mM) + DGSY (2 mg/ml)和LPS (100 ng/ml) + ATP (2.5 mM) + MCC950 (20 nM)处理BMDM细胞，并进行NLRP3的免疫荧光染色。（J） BMDM 中 NLRP3 的荧光强度定量。平均值 ± 标准误差，* p < 0.05，** p < 0.01，ns，无显著性差异。

DGSY通过NLRP3依赖性机制对MASH发挥治疗作用

为了揭示DGSY的作用是否依赖于NLRP3通路，我们在喂食高脂高胆固醇（HFHC）饮食14周的小鼠中敲低了NLRP3的表达。随后，从HFHC饮食18周开始，对小鼠进行为期6周的DGSY治疗（图5A）。Western blot和PCR结果证实了NLRP3的成功敲低（图5C-E）。我们发现，NLRP3的阻断消除了体重（BW）、肝脏重量（LW）和肝脏重量/体重比值（LW/BW）的降低（补充图2）。肝脏甘油三酯（TG）含量测定和油红O染色结果显示，DGSY能够显著降低AAV9-NC组小鼠HFHC饮食引起的脂质沉积，而这种保护作用在AAV9-NLRP3组中几乎完全消失（图5F，5G）。同时，DGSY诱导的ALT（肝损伤的标志性酶）活性抑制作用可通过NLRP3敲低逆转（图5H）。此外，H&E染色显示，NLRP3敲低消除了DGSY治疗对高脂高胆固醇（HFHC）诱导的肝脏病理改变的缓解作用（图5F、5I-L）。在喂食HFHC 24周的小鼠中，DGSY介导的FINS和HOMA-IR水平降低也被NLRP3敲低所消除（图5M -O）。综上所述，这些数据表明，阻断NLRP3信号通路可消除DGSY对MASH的治疗作用。

图5. NLRP3敲低消除了DGSY对MASH的治疗作用。(A) NLRP3敲低模型的建立及给药方案示意图。(B)小鼠体重测量。(C) WB验证NLRP3敲低成功。(D)小鼠肝组织切片中NLRP3蛋白的定量分析。(E) PCR验证NLRP3敲低成功。(F)肝脏外观、油红O染色和H&E染色。(G)肝脏甘油三酯含量。(H)血清ALT水平。(IL)肝组织切片的MASLD活动评分(I)、脂肪变性(J)、小叶炎症(K)和肝细胞气球样变(L)。(MO)血清空腹血糖(FBG)、空腹胰岛素(FINS)和稳态模型胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)。平均值±标准误，n=8。 * p < 0.05，** p < 0.01，ns，无统计学意义。

为了进一步验证DGSY对NLRP3信号通路的调控作用，我们采用Western blotting检测了体内外NLRP3、caspase1和IL-1β的表达。体内实验进一步证实，在NLRP3敲低小鼠中，DGSY对NLRP3的激活作用几乎完全消失（图6 A-B）。与此一致的是，DGSY对其他相关蛋白（caspase1和IL-1β）表达水平的抑制作用在NLRP3阻断后显著逆转（图6 C-G）。因此，我们认为DGSY的作用依赖于NLRP3的激活。体外实验采用NLRP3敲低小鼠来源的骨髓来源巨噬细胞（BMDM）（图6 H）。在LPS+ATP刺激下，DGSY抑制了BMDM中NLRP3、caspase1和IL-1β的表达。此外，当 NLRP3 受到干扰时，抑制作用几乎完全消失（图 6 I-O）。

图 6.机制上，NLRP3 的敲低或敲除消除了 DGSY 对 NLRP3/caspase1/IL-1β 轴的影响。(A)小鼠肝组织样本中 NLRP3 蛋白的 WB 检测。(B)小鼠肝组织样本中 NLRP3 蛋白的定量分析。(C)小鼠肝组织样本中 caspase1、pro-caspase1、IL-1β 和 pro-IL-1β 的 WB 检测。(DG)小鼠肝组织样本中 caspase1 (D)、IL-1β (E)、pro-caspase1 (F) 和 pro-IL-1β (G) 的定量分析。(H) BMDM 的提取和培养流程。(I)从 8 周龄野生型 C57BL/6J 小鼠和全身性 NLRP3敲除小鼠的股骨骨髓中分离 BMDM 。将 BMDM 细胞分别用 LPS (100 ng/ml) + ATP (2.5 mM) 和 LPS (100 ng/ml) + ATP (2.5 mM) + DGSY (2 mg/ml) 处理，然后进行 WB 检测 BMDM 细胞中 NLRP3 蛋白的表达。(J)对 BMDM 细胞中 NLRP3 蛋白进行定量分析。(K)对 BMDM 细胞中 caspase-1、pro-caspase-1、IL-1β 和 pro-IL-1β 蛋白进行 WB 检测。(LO)对 BMDM 细胞中 caspase-1 (L)、IL-1β (M)、pro-caspase-1 (N) 和 pro-IL-1β (O) 蛋白进行定量分析。结果以平均值 ± 标准误表示，* p < 0.05，** p < 0.01，ns 表示无统计学意义。

DGSY的主要活性成分抑制巨噬细胞中NLRP3的表达。

为了进一步探究DGSY抑制巨噬细胞NLRP3的潜在活性成分，我们采用超高效液相色谱-四极杆-Orbitrap高分辨率质谱（UHPLC-Q-Orbitrap HRMS）分析了DGSY衍生的化合物以及血液和肝脏吸收的化合物。详细的化合物信息见补充表2-4。结果显示，DGSY成分中含量最高的十种单体如下：芍药苷、白芍苷、儿茶素、没食子酸、苍术内酯III、棕榈酸、阿魏酸、咖啡酸、对羟基苯甲酸和新绿原酸（图7A）。肝脏吸收含量最高的十种单体如下：棕榈酸、芍药苷、阿魏酸、氧化芍药苷、仙草内酯A、苍术内酯III、没食子酸、阿利醇A、阿利醇B和白芍苷（图7B）。血液吸收排名前十的单体成分如下：棕榈酸、阿魏酸、芍药苷、氧化芍药苷、没食子酸、阿利醇A、阿利醇B、苍术内酯III、仙草内酯A和23-乙酰阿利醇C（图7C）。其中，五种活性成分同时存在于化合物、血液和肝脏中（图7D）。然而，由于棕榈酸已被报道具有促进肝脂肪变性的作用，因此被认为是一个不利因素。因此，本研究在BMDM细胞中考察了其余四种活性成分（包括阿魏酸、芍药苷、没食子酸和苍术内酯III）对NLRP3的影响。结果表明，苍术内酯III和没食子酸是DGSY中最有效的活性成分，能够降低NLRP3的表达（图7E -L）。

图7. DGSY中抑制巨噬细胞NLRP3表达的主要活性成分筛选。(A)从DGSY中提取的前10种生物活性成分的交集。(B) DGSY在肝脏中的前10种生物活性成分。(C) DGSY在血液中的前10种生物活性成分。(D)维恩图。（EL） BMDM细胞分别用DMSO、LPS（100 ng/ml）+ ATP（2.5 mM）、LPS（100 ng/ml）+ ATP（2.5 mM）+ PAE（50 μM）、LPS（100 ng/ml）+ ATP（2.5 mM）+ PAE（100 μM）处理；（E）BMDM细胞分别用DMSO、LPS（100 ng/ml）+ ATP（2.5 mM）、LPS（100 ng/ml）+ ATP（2.5 mM）+ ATL-III（50 μM）、LPS（100 ng/ml）+ ATP（2.5 mM）+ ATL-III（100 μM）处理；（F）BMDM细胞分别用DMSO、LPS（100 ng/ml）+ ATP（2.5 mM）、LPS（100 ng/ml）+用 ATP (2.5 mM) + FA (50 μM)、LPS (100 ng/ml) + ATP (2.5 mM) + FA (100 μM) (G) 处理 BMDM 细胞，用 DMSO、LPS (100 ng/ml) + ATP (2.5 mM)、LPS (100 ng/ml) + ATP (2.5 mM) + GA (50 μM)、LPS (100 ng/ml) + ATP (2.5 mM) + GA (100 μM) (H) 处理 BMDM 细胞，进行 WB 检测和 BMDM 细胞中 NLRP3 蛋白的定量分析。结果以平均值 ± 标准误表示，* p < 0.05，** p < 0.01。

【Citation】:Huang, Q., Lyu, S., Xin, X., An, Z., Sun, Q., Gao, S., Hu, Y., Gou, X., & Feng, Q. (2026). Danggui-Shaoyao-San ameliorates metabolic dysfunction-associated steatohepatitis via suppressing hepatic macrophage NLRP3 inflammasome. Journal of ethnopharmacology, 121578.

【贡献】★★★★★

总之，我们的研究表明，DGSY对MASH具有保护作用。从机制上讲，DGSY治疗MASH的机制是通过抑制肝巨噬细胞中的NLRP3炎症小体、抑制caspase-1活性以及减少IL-1β释放。这些发现为DGSY未来潜在的临床应用提供了实验证据。

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