疫苗前沿 | 基于临床样本分析，设计多表位mRNA癌症疫苗

文献题目：Rationale for multi-epitope TGFβ vaccination in pancreatic cancer: evidence from immunologic and clinical correlates（胰腺癌多表位TGFβ疫苗接种的理论依据：免疫学与临床相关性的证据）

发表期刊：Signal Transduction and Targeted Therapy

发表时间：2026年3月24日（在线发表）

研究团队：丹麦哥本哈根大学医院国家癌症免疫治疗中心

主要研究结果：研究确定了多个具有高度免疫原性的TGFβ衍生表位（TGFβ-15, -33, -38），并证实PDAC患者体内存在针对这些表位的自发性T细胞反应。研究发现，基线时具有高频率TGFβ-33特异性T细胞的患者，在接受免疫检查点抑制剂（ICI）联合放疗后表现出更佳的临床预后。特别是，针对多个TGFβ表位均有反应的患者，其总生存期（OS）和无进展生存期（PFS）显著延长。此外，研究成功开发了一种编码多个TGFβ表位的单mRNA构建体，证明了多表位mRNA疫苗激活多种特异性T细胞的潜力。

研究背景

胰腺导管腺癌（PDAC）因其极低的生存率和极强的治疗耐受性被称为“癌王”。尽管免疫检查点抑制剂（ICIs）在多种肿瘤中取得了革命性进展，但在胰腺癌中却收效甚微，主要归因于其高度免疫抑制且纤维化的肿瘤微环境（TME）。在这一环境中，转化生长因子-β（TGFβ）扮演了关键角色。它不仅由癌细胞和癌症相关成纤维细胞（CAFs）大量分泌，促进肿瘤纤维化和转移，还能直接阻断T细胞的浸润与功能，使肿瘤呈现“冷”表型。现有的TGFβ靶向疗法（如单抗或受体抑制剂）疗效有限且存在毒性。因此，开发能够激活抗调节性T细胞、直接消除分泌TGFβ的免疫抑制细胞的免疫调节疫苗（IMVs），成为将“冷”肿瘤转变为“热”肿瘤、协同增强免疫治疗效果的创新策略。

核心内容详解

（一）TGFβ衍生表位的免疫原性筛选与特征分析

研究对象与方法：研究人员首先利用覆盖TGFβ全长序列的38个重叠20聚体肽库，对31名健康献血者（HD）进行体外IFNγ ELISPOT筛查。随后，随机选取14名来自TRIPLE-R临床试验的PDAC患者，验证这些表位在真实患者群体中的免疫活性。实验通过12-14天的肽刺激诱导T细胞扩增，再进行二次刺激检测细胞因子分泌。

研究结果：在健康献血者中，TGFβ-15、TGFβ-33和TGFβ-38显示出极高的反应频率。数据显示，TGFβ-15与TGFβ-33在HD队列中的反应强度存在统计学差异。在PDAC患者队列中，这三个表位同样能诱导强烈的IFNγ产生。值得注意的是，尽管未达统计学显著，但TGFβ-33在患者中表现出更强且更频繁的反应趋势。细胞内细胞因子染色（ICS）进一步揭示，这些反应主要由CD4+ T细胞介导，但在部分献血者中也检测到了针对TGFβ-33的CD8+ T细胞反应。

实验小结：本部分实验成功验证了TGFβ分子中存在多个高效免疫原性区段，其中TGFβ-33被确定为患者体内最活跃的表位之一。这为开发多表位疫苗奠定了候选序列基础。

（二）循环TGFβ-33特异性记忆T细胞的鉴定

研究对象与方法：为了探究TGFβ特异性T细胞是否在体内已被激活并形成长期免疫保护，研究者使用磁珠分选技术（MACS）从HD和患者的PBMC中分拣出高纯度的CD4+CD45RO+记忆T细胞。通过与脉冲了相应肽段的自体单核细胞共培养12天，观察其增殖与反应能力。

研究结果：ELISPOT和ICS结果均显示，无论是健康人还是胰腺癌患者，其体内均存在能识别TGFβ-33的记忆T细胞。有趣的是，在ICS分析中，从患者体内富集的记忆T细胞反应强度明显高于健康献血者。

实验小结：胰腺癌患者体内更强的记忆T细胞反应可能反映了肿瘤微环境中TGFβ的过度表达对免疫系统的持续刺激。这一发现证明了利用疫苗进一步扩增这些预存免疫力的可行性。

（三）基线TGFβ免疫反应与胰腺癌患者临床获益的相关性

研究对象与方法：研究团队对27名接受放疗联合检查点抑制剂治疗的PDAC患者进行了前瞻性分析。根据治疗效果，患者被分为临床获益组（PR或SD，15人）和进展组（PD，12人）。利用ELISPOT检测患者基线（治疗前）对TGFβ-33和TGFβ-15的T细胞反应水平。

研究结果：临床获益组患者的基线TGFβ-33反应水平显著高于进展组。Kaplan-Meier生存曲线显示，基线TGFβ-33反应高于中位数的患者，其总生存期（OS）和无进展生存期（PFS）显著延长。更具突破性的是，当同时评估TGFβ-15和TGFβ-33的反应时，对两种表位均有强烈反应的患者预后最佳，而仅对一种或无反应的患者生存期较短。

实验小结：数据有力证明了多表位T细胞反应是预测胰腺癌免疫治疗成功的关键生物标志物。相比单一表位，多表位免疫激活与更显著的生存获益直接相关。

（四）特异性T细胞对TGFβ高表达靶细胞的识别机制

研究对象与方法：研究者利用快速扩增方案（REP）建立了多组特异性T细胞系，并测试其对自体树突状细胞（DCs）及恶性髓系细胞系THP-1的识别能力。为证明蛋白依赖性，实验采用了siRNA介导的TGFβ敲低技术和重组蛋白诱导的高表达模型。

研究结果：特异性CD4+ T细胞不仅能识别肽脉冲的DCs，还能上调颗粒酶B和颗粒溶素等细胞毒性分子的表达。在针对THP-1的实验中，敲低TGFβ显著降低了T细胞的激活，而外源TGFβ处理增强了识别。值得注意的是，尽管敲低TGFβ会意外增加HLA-II分子的表面表达，但T细胞激活依然下降，这确证了识别过程是由TGFβ抗原丰度驱动的，而非受限于抗原呈递机器。

实验小结：实验从分子水平证实了这些特异性T细胞能够精准识别并靶向自然表达或过度表达TGFβ的细胞，具备直接攻击肿瘤微环境内抑制性成分的潜力。

（五）多表位mRNA疫苗构建体的有效性验证

研究对象与方法：研究团队设计了一个名为TGFβ-ALL的质粒，编码包含TGFβ-02、-15、-33和-38四个序列的复合表位区。通过体外转录合成mRNA，并将其转染至自体DCs中，观察其能否同时激活四种不同特异性的T细胞克隆。

研究结果：转染了多表位mRNA的DCs能够成功加工并呈递所有包含的表位。与对照组相比，共培养导致了四种特异性CD4+ T细胞群体的显著激活，表现为TNFα和CD107a的高表达。尽管不同表位诱导的反应强度有所差异，但单一mRNA构建体确实实现了多靶点免疫激活。

实验小结：这一结果验证了mRNA平台在多表位疫苗递送中的优越性，证明了单个构建体即可诱导广泛的抗肿瘤免疫反应，为临床转化提供了直接证据。

小结

本研究深入探讨了多表位TGFβ免疫调节疫苗在胰腺癌治疗中的理论基础。研究不仅确定了TGFβ衍生肽在PDAC患者中的高度免疫原性，还揭示了预存的多表位T细胞反应与临床免疫治疗获益及生存期延长显著相关。通过成功构建多表位mRNA疫苗并验证其功能，研究证明了该策略在重塑“冷”肿瘤微环境方面的巨大潜力。这种多表位策略能够同时激活针对肿瘤细胞及免疫抑制细胞的攻击，为改善胰腺癌等难治性肿瘤的免疫治疗效果提供了极具前景的新路径。

参考文献

[1] Ruders JH, Ahmad SM, Mortensen REJ, Met Ö, Byrdal M, Chen IM, Theile S, Holmström MO, Andersen MH. Rationale for multi-epitope TGFβ vaccination in pancreatic cancer: evidence from immunologic and clinical correlates. Signal Transduct Target Ther. 2026 Mar 24;11(1):107.

注：本文仅作为医疗健康领域前沿进展分享， 非 治 疗 方 案 推 荐。

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撰写| RNA星球

校稿| Gddra编审| Hide / Blue sea

编辑 设计| Alice