北京
两性霉素B是多烯类抗真菌经典药物，通过结合真菌细胞膜中的麦角固醇破坏膜结构的完整性，导致离子和代谢物的外流，真菌死亡。然而，中日友好医院曹彬教授团队联合多位合作者于2026年3月9日发表于Nature Communication 的一项研究揭示，这一经典药物在体内外模型中意外增强了甲型流感病毒（IAV）和SARS-CoV-2等呼吸道病毒的入侵与致病性，且在回顾性临床研究中发现使用两性霉素B与继发呼吸道病毒感染风险升高相关。
由于两性霉素B（AmB）也可以和哺乳动物细胞上的胆固醇结合，抑制胆固醇依赖性的小窝蛋白介导的内吞作用，因此AmB也影响多种病毒的入侵过程。但是，其对IAV和SARS-CoV-2感染的作用及机制尚未完全被阐明。特别是，作为一种抗真菌药物，AmB的临床应用是否会对继发病毒感染风险产生影响，缺乏临床数据支持。
实验设计与核心发现
1. AmB在动物模型中加剧病毒感染与组织损伤
为验证AmB是否在体内加重病毒感染，研究团队构建了两个独立模型：IAV感染的C57BL/6小鼠和SARS-CoV-2感染的叙利亚金黄地鼠。动物在病毒攻击前后给予临床相关剂量（1 mg/kg）的AmB。结果显示，AmB治疗组体重下降显著加速，肺组织病毒滴度升高，免疫组化显示病毒抗原阳性细胞增多，病理切片呈现更广泛的肺泡出血、坏死和炎性浸润。这证明AmB在体内可加剧流感与新冠的病程。
2. 临床队列证实AmB与继发病毒感染独立相关
为验证上述发现的临床意义，团队对2016—2025年1072例培养确诊肺曲霉病的住院患者进行了回顾性分析。由于接受AmB的患者基线病情更重，研究者采用倾向评分匹配（PSM）校正混杂因素。在匹配后的队列中，AmB组继发呼吸道病毒感染率显著高于非AmB组（21.55% vs 7.76%，P=0.003）。多变量回归分析显示，AmB是继发病毒感染的独立危险因素（校正后OR=3.45）。敏感性分析提示这一效应可能为AmB所特有。
3. AmB增强病毒入侵，但不影响病毒附着与内吞
为解析AmB的作用环节，研究者使用A549细胞和假病毒系统进行研究。结果显示，AmB处理显著增强IAV和SARS-CoV-2假病毒的入侵，但对病毒颗粒与细胞结合、内化及网格蛋白/小窝蛋白介导的内吞过程均无影响，表明AmB作用于更下游环节。
4. AmB促进病毒从晚期内体中膜融合逃逸
通过细胞共定位分析发现，AmB处理不影响病毒在早期内体中的分布，但病毒在晚期内体中的滞留减少，向核周弥散加速。双荧光标记病毒融合实验进一步证实，AmB处理细胞中病毒-内体膜融合显著增强。酸旁路实验则排除了对质膜融合的影响。利用不同内体依赖性假病毒系统，研究者发现AmB仅增强从晚期内体逃逸的病毒，如IAV、SARS-CoV-2、MERS-CoV的入侵，而对从早期内体逃逸的VSV无增强作用，明确了AmB作用于病毒与晚期内体膜融合阶段。
5. 葡萄糖脑苷脂酶GCase是AmB在晚期内体中的直接靶点
为寻找AmB的作用靶点，研究者合成了生物素化的AmB探针，从A549细胞中纯化晚期内体组分进行pull-down实验，结合质谱鉴定出葡萄糖脑苷脂酶（GCase）可能是AmB结合靶蛋白。表面等离子体共振（SPR）证实AmB与重组GCase直接结合，亲和力为23 μM。这是首次发现AmB可直接靶向这一鞘脂代谢关键酶。
6. AmB通过激活GCase重塑内体膜促进病毒进入
GCase催化葡萄糖神经酰胺生成神经酰胺。功能实验显示，AmB处理可增强GCase酶活性，并导致晚期内体中神经酰胺水平显著升高。利用CRISPR敲除GBA1基因或使用GCase抑制剂CBE，均可显著削弱AmB促病毒入侵的效应。这说明AmB的促病毒活性依赖于GCase及其介导的神经酰胺代谢改变。
7. AmB以GCase依赖性方式上调晚期内体成熟标志物
为全面解析AmB对内体的影响，研究者对早期和晚期内体进行了蛋白质组学分析。结果显示，AmB显著上调晚期内体成熟相关蛋白，尤其是RAB7及其效应分子RILP、CAV1。Western blot证实RAB7蛋白水平在AmB处理后升高，而在GBA1敲除细胞中RAB7水平降低，提示GCase活性对维持正常内体成熟至关重要。
结论与临床启示
本研究揭示了两性霉素B通过结合并激活晚期内体中的GCase，引起神经酰胺积累和内体成熟加速，从而促进IAV和SARS-CoV-2等病毒感染。
本研究对临床实践具有警示意义：在侵袭性肺曲霉病患者中，尤其是病毒感染高风险时期，选择抗真菌方案需权衡AmB可能带来的病毒易感性增加。
研究也为开发新型抗病毒策略提供了潜在靶点——适度抑制GCase或调控内体鞘脂代谢，可能阻断多种从晚期内体逃逸的病毒入侵。
原文链接：https://www.nature.com/articles/s41467-026-70095-x
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