第二代siRNA转染试剂开启RNAi研究新篇章

RNA干扰（RNAi）技术作为分子生物学领域中基因功能研究、疾病机制探索及药物靶点筛选的核心技术之一，其应用效果高度依赖于siRNA向靶细胞内的高效递送。在该技术发展初期，专用的siRNA 转染试剂尚未实现商业化，研究者多采用Lipofectamine 2000、Lipofectamine 3000等以大分子质粒DNA作为主要递送对象的转染试剂开展siRNA转染实验，这些试剂确实能满足部分细胞的基础siRNA转染需求，但普遍存在转染效率局限性强、细胞毒性显著等问题，难以适配多样化的细胞类型以及更高要求的RNAi实验，因此也被称为第一代siRNA转染试剂。

随着RNAi技术在生命科学研究及生物医药领域的广泛渗透，对siRNA转染的特异性、高效性及细胞毒性等方面提出了更高标准，第二代新型siRNA转染试剂应运而生，其在试剂配方优化、递送机制创新等方面实现了突破性进展，典型代表包括百代生物的RFect V2siRNA转染试剂与赛默飞的Lipofectamine RNAiMAX。

相较于第一代siRNA转染试剂，第二代试剂在转染效率、细胞毒性和操作简便性上均实现了全方位优化，不仅显著提升了实验效能，更将整个RNAi研究领域推向了新的高度，让RNAi研究更上一层楼！

一、转染效率

转染效率是siRNA转染试剂的核心性能指标，直接决定了RNAi 实验的成败与研究数据的可靠性。

第一代siRNA转染试剂以Lipofectamine 2000/3000为代表，采用脂质体成分构建核酸递送系统，虽在部分耐受性强的细胞中能实现一定的转染效果，但在转染普适性和高效性上存在明显局限。其递送机制相对单一，对细胞类型的适配性较窄，尤其在原代细胞、干细胞、部分肿瘤细胞系等难转染细胞中，往往难以达到理想的转染效果，限制了RNAi技术在更多研究场景中的应用。

而第二代siRNA转染试剂通过创新递送技术与配方优化，在转染性能上实现了质的飞跃。以百代生物RFect V2为例，其采用新型可降解纳米材料作为递送载体，并配套研发了专属siRNA转染增强剂，两者搭配使用可帮助调节细胞膜表面的电荷分布与受体表达，有效抑制细胞对异源核酸的免疫排异反应，进一步促进了转染复合物与细胞膜的融合及胞内释放。大量实验数据表明，RFect V2在多种贴壁细胞（如Hela、HEK293、BEAS-2B 等）中的mRNA敲除效率可高达95%左右，即便在Huvec、THP-1等难转染细胞中也能实现高效转染。另一款第二代试剂Lipofectamine RNAiMAX则通过优化脂质体成分配比，强化了与siRNA的结合效率及胞内释放能力，在低浓度siRNA条件下即可获得理想转染效果，不仅降低了高浓度siRNA可能引发的非特异性基因沉默效应，还提升了实验的特异性与可靠性，是目前国际公认的最为权威的一款siRNA转染试剂。在Hela细胞中进行的NC-FAM小核酸转染对比实验显示，RFect V2与RNAiMAX的转染效率均突破90%，可视化层面呈现出相当的转染效果。

二、细胞毒性

细胞毒性是影响细胞活性与实验结果真实性的关键因素，尤其对于对毒性敏感的细胞株或原代细胞研究而言，低毒性试剂是保障实验顺利开展的前提。

第一代siRNA转染试剂在细胞毒性控制方面存在明显短板，以Lipofectamine 3000为例，尽管厂家声称其对细胞作用温和，但大量科研实践表明，该试剂对部分细胞系（尤其是对脂质体敏感的细胞）仍存在较为明显的毒性。多数研究者反馈，使用Lipofectamine 3000转染后若未在6-8小时内及时更换新鲜培养基，细胞死亡率可能高达20-30%，这一现象严重限制了其在原代细胞、干细胞等敏感细胞类型中的应用，研究者所得到的实验数据也可能因细胞损伤而导致失真。

第二代siRNA转染试剂在配方设计与递送机制上充分考虑了细胞毒性问题，实现了高效转染与低毒性的平衡。Lipofectamine RNAiMAX作为国际权威试剂，通过针对性优化脂质体成分配比，降低了对细胞的刺激性，相较于第一代试剂，细胞相容性显著提升，转染后无需换液处理即可维持较好的细胞活性。而国产试剂RFect V2在细胞毒性控制方面表现更为突出，其采用的新型可降解纳米载体在完成siRNA递送后，能在细胞内快速降解为无毒或低毒的代谢产物，避免了载体材料在胞内蓄积引发的毒性反应，同时减少了对细胞内环境稳态的干扰。在30-50%的最佳细胞融合度条件下转染，RFect V2转染后细胞死亡率仅为5%左右，不仅远低于第一代Lipofectamine 3000，甚至更优于Lipofectamine RNAiMAX，这一特性使其在对毒性敏感的细胞，尤其是极为脆弱的原代细胞转染中具有独特优势，为这类细胞的RNAi研究提供了更可靠的技术保障。

三、操作简便性

实验操作的简便性直接影响实验效率、可重复性以及人力成本，尤其是对于高频次开展siRNA转染实验的实验室而言，简便易操作的试剂能显著提升研究进度。

第一代siRNA转染试剂在操作流程上存在诸多不便，如使用Lipofectamine 2000/3000进行转染时，需要额外采购Opti-MEM减血清培养基来配制转染复合物，增加了实验的附加成本；同时，由于第一代试剂细胞毒性相对较高，多数情况下转染后6-8小时内必须进行换液处理，不仅延长了实验周期，还可能因换液时机、操作手法的差异导致实验结果的重复性降低，增加实验的误差风险。

第二代siRNA转染试剂通过流程优化，大幅提升了操作便捷性，其中RFect V2的表现尤为突出。与第一代试剂及同为第二代的 Lipofectamine RNAiMAX相比，RFect V2无需依赖Opti-MEM等特殊无血清培养基，其配套的转染增强剂Trans Enhancer可直接替代无血清培养基用于转染复合物的配制，不仅简化了实验流程，还避免了因培养基更换导致的转染效率波动。同时，血清成分对RFect V2的转染效果无显著影响，转染后也无需进行换液处理，既降低了实验操作难度，又减少了换液过程中可能造成的细胞损伤，极大地提升了实验的可重复性与稳定性。Lipofectamine RNAiMAX虽在转染后无需换液，简化了部分步骤，但在转染复合物配制时仍需额外购买Opti-MEM减血清培养基，在操作便捷性和成本控制上略逊于RFect V2。

综上而言，第二代siRNA转染试剂无论是在转染效率、细胞毒性还是在操作简便性方面，均实现了对第一代转染试剂的全面超越。特别是百代生物的RFect V2，作为一款自主研发的国产siRNA转染试剂，不仅核心转染性能上可完全媲美国际权威试剂Lipofectamine RNAiMAX，甚至在细胞毒性和操作简便性方面还要更优于Lipofectamine RNAiMAX。如果只考虑性能优势而不考虑进口试剂的虚拟光环，RFect V2显然已具备完全替代Lipofectamine RNAiMAX的竞争实力。