ATTO 647 Maleimide，AT 647 Mal，ATTO 647马来酰亚胺的实验设计

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产品名称：ATTO 647 Maleimide，AT 647 Mal，ATTO 647马来酰亚胺的实验设计优化
一、标记效率提升：多策略协同优化
摩尔比控制
染料与目标分子摩尔比通常为2-5:1（如抗体标记），通过紫外光谱法（A280蛋白吸收与ATTO 647特征峰A647吸光度）计算F/P值（每摩尔蛋白结合染料摩尔数），确保标记密度适中（避免过度标记导致蛋白活性丧失或聚集）。
纯化与封闭
反应后通过凝胶过滤（Sephadex G-25）、超滤管（10-30 kDa分子量截留）或透析去除游离染料及副产物，降低背景信号；使用N-乙基马来酰亚胺（NEM）封闭未反应的巯基，减少非特异性结合。
抗淬灭与稳定性增强
添加抗淬灭剂（如抗坏血酸、ProClin 300）提升荧光稳定性；标记后样品需避光存储（-20℃或4℃），避免反复冻融导致染料降解。
二、生物相容性与安全性管理
细胞毒性控制
低毒性，适用于活细胞成像（如细胞膜标记、内吞途径追踪），需通过MTT/CCK-8实验验证标记后细胞活性无显著下降；控制紫外光曝光时间（<50ms/帧），减少光损伤。
生物活性验证
通过功能实验（如酶活性测定、细胞结合实验、ELISA）确认标记后蛋白/抗体的生物活性保留；例如，标记抗体需验证其与抗原的结合能力，确保实验准确性。
储存与操作规范
染料需-20℃避光干燥保存，避免反复冻融；操作时佩戴手套、护目镜，废液按实验室危险废物处理，防环境污染；避免与强氧化剂接触，防爆炸风险。
三、多维度验证与实验设计
光谱与电泳验证
通过紫外-可见光谱确认标记前后吸光度变化，结合荧光光谱仪测定发射峰位置及强度；SDS-PAGE电泳观察荧光条带迁移，确认标记成功及蛋白完整性。
多色标记与补偿
近红外荧光（ATTO 647）与蓝光（AF350）、绿光（AF488）等通道无串扰，支持多色共定位；多色实验需荧光补偿校正，消除信号串扰。
对照实验设计
设置阴性对照（未标记蛋白）、阳性对照（已知标记效率的标准品）及空白对照（无蛋白反应），验证标记特异性及实验可靠性。

我们可以提供的产品
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Folate-PEG-Amine，叶酸聚乙二醇氨基，FA-PEG-NH2‌
Acrylamide-PEG-Biotin，Biotin-PEG-ACA‌，丙烯酰胺PEG生物素
Folate-PEG-Azide，叶酸-聚乙二醇-叠氮，FA-PEG-N3
4-Arm PEG-Nitrophenyl Carbonate，四臂聚乙二醇硝基苯基碳酸酯，4-Arm PEG-NPC
NH2-PEG-Mal，Maleimide-PEG-Amine，马来酰亚胺-聚乙二醇-氨基
Rhodamine B PEG Biotin，罗丹明B聚乙二醇生物素，RB PEG Biotin的靶向效率