GMP车间纯化水系统霉菌污染的调查、检测要点、控制策略

引言：在制药行业，GMP（良好生产规范）车间与纯化水系统的微生物控制至关重要。霉菌作为常见的微生物污染源，一旦在洁净区出现，不仅会影响药品质量，还可能引发监管问题，导致审查、警告信甚至暂停运营。奥克泰士工程师本文将深入探讨制药GMP车间和纯化水系统霉菌污染的调查、检测要点、控制策略以及相关监管标准。

关键词：制药、GMP车间、纯化水系统污染、霉菌、不可接受微生物、洁净区霉菌控制、医疗器械、化妆品、卫生用品、不可接受微生物、生物膜、BCC、洋葱伯克霍尔德菌、罗尔斯通氏菌、奥克泰士微生物控制服务商、制药用水、医用水系统、医疗用水等、制药用水消毒专家。

一、制药GMP车间洁净区微生物检测要点解析

（一）浮游菌检测

浮游菌是指悬浮在空气中的微生物，其检测能反映洁净区空气中微生物的动态污染情况。检测时，使用浮游菌采样器，通过一定的气流速度，将空气中的微生物收集在培养基表面，然后进行培养计数。采样点的布置应均匀，涵盖洁净区的各个区域，包括人员活动频繁处、物料传递口等。采样频率根据洁净级别和生产情况而定，一般C、D级洁净区每周或每两周进行一次检测。

（二）沉降菌检测

沉降菌是通过自然沉降原理收集空气中的微生物。将培养皿放置在洁净区内的规定位置，暴露一定时间后，盖上培养皿盖，进行培养计数。沉降菌检测操作相对简单，但受环境因素影响较大，如空气流动、人员走动等。暴露时长根据洁净级别不同而有所差异，C级洁净区一般为30—60分钟，D级洁净区可适当延长。

（三）表面微生物检测

表面微生物检测用于评估洁净区物体表面的微生物污染情况。采用接触碟法或拭子法进行采样。接触碟法是将培养基直接接触物体表面，轻轻按压后取下培养；拭子法是用无菌拭子擦拭物体表面一定面积，然后将拭子放入培养液中培养。检测对象包括设备表面、工作台面、墙壁、门窗等。

（四）霉菌检测要点（参考）

采样方法：对于霉菌检测，在上述各种检测方法中，需特别注意采样的全面性。由于霉菌孢子体积微小且容易飘散，在采样过程中要尽量覆盖可能存在霉菌污染的区域，如墙角、天花板角落、设备缝隙等隐蔽部位。

培养基选择：应选用对霉菌具有选择性的培养基，如马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA），以促进霉菌的生长并抑制其他杂菌，便于准确识别和计数霉菌菌落。

培养条件：霉菌培养通常需要在特定的温度和湿度条件下进行，一般培养温度为 25 - 30℃，培养时间相对较长，约 5 - 7 天，以确保霉菌充分生长形成明显的菌落特征，便于观察和鉴定。

（五）洁净室沉降菌重复性验证

洁净室沉降菌重复性验证旨在确保沉降菌检测结果的可靠性和一致性。在进行验证时，需在相同的条件下，对同一区域进行多次沉降菌检测，分析每次检测结果的差异。如果多次检测结果之间的偏差在可接受范围内，说明检测方法具有良好的重复性。验证过程中要严格控制各种因素，如采样点位置、平皿暴露时间、培养条件等保持一致，以准确评估检测方法的重复性。

二、GMP车间：洁净区从霉菌污染调查看微生物控制

（一）霉菌污染调查流程

发现与评估：当在洁净区检测到霉菌或发现霉菌污染迹象（如出现霉味、可见菌斑等）时，首先要对污染情况进行评估，确定污染的范围、严重程度以及可能影响的区域。例如，通过对发现霉菌的位置、菌落数量、分布情况等进行详细记录和分析，初步判断污染的严重程度。

采样与检测：对污染区域及周边进行全面采样，包括空气、表面等不同类型的样品，采用合适的检测方法（如前文所述的浮游菌、沉降菌、表面微生物检测等）进行检测，确定霉菌的种类和数量。同时，对相关的生产设备、原料、水系统等也进行采样检测，查找可能的污染源。

溯源分析：根据检测结果，结合生产记录、人员活动情况、设备运行状态等信息，进行溯源分析。例如，如果在某台设备表面检测到大量霉菌，且该设备近期维修过，就需要调查维修过程是否引入了污染源；或者如果在某个区域的空气中检测到高浓度的霉菌孢子，而该区域附近的空调滤网近期未更换，就需要考虑空调系统是否为污染源，对并联车间的纯化水系统是否有影响等。

制定措施：根据溯源分析的结果，制定针对性的纠正和预防措施。如果确定是人员操作不规范导致的污染，就需要加强人员培训和监督；如果是设备清洁消毒不彻底，就需要优化清洁消毒程序和方法。措施要明确责任人和时间节点，确保能够有效实施。

（二）纠偏措施

立即清洁与消毒：一旦发现霉菌污染，对污染区域及周边进行立即清洁和消毒。使用有效的消毒剂，如奥克泰士等，按照规定的浓度和方法进行喷洒、擦拭等处理，确保杀灭霉菌。对受污染的设备、工具等要进行彻底的清洗和消毒，必要时进行拆卸清洗，确保无残留。

加强监测：在采取纠偏措施后，要加强对该区域的微生物监测，增加监测频次和采样点。例如，从原来的每周一次监测增加到每天一次，对污染区域及其相邻区域进行全面监测，及时掌握微生物污染情况的变化，确保污染得到有效控制。

人员培训与教育：针对污染原因，对相关人员进行培训和教育，提高他们对微生物控制的认识和操作技能。例如，如果是因为员工未正确进行清洁消毒操作导致污染，就需要重新培训清洁消毒的标准方法和流程，并进行考核，确保员工掌握正确的操作方法。

（三）微生物控制体系优化

完善制度与流程：通过对霉菌污染事件的调查和分析，查找微生物控制体系中存在的漏洞和不足，完善相关的制度和流程。例如，如果发现现有的清洁消毒制度在某些关键环节规定不明确，就需要对制度进行修订，明确操作步骤、消毒时间、消毒剂浓度等具体要求。

持续改进：将霉菌污染事件作为持续改进的机会，对整个微生物控制体系进行评估和优化。定期对微生物监测数据进行分析，总结规律，及时发现潜在的问题并采取预防措施。同时，关注行业内的最新技术和标准，不断更新和完善微生物控制措施。

（四）如C级洁净区检测出霉菌偏差处理

若C级洁净区检测出霉菌偏差，应立即停止相关生产活动，对受影响的区域进行隔离。重新评估清洁消毒程序的有效性，增加检测频率和范围。对可能受到污染的物料和产品进行评估和处理，必要时进行销毁。同时，分析偏差产生的原因，采取预防措施，防止类似偏差再次发生。

三、GMP车间洁净区污染来源、途径、类型及预防措施

（一）污染来源

人员是洁净区的主要污染来源之一，人体的毛发、皮肤碎屑、微生物等都可能污染洁净区。原料在运输、储存过程中若受到污染，也会带入洁净区。空气中的灰尘、微生物可通过通风系统进入洁净区。水系统若存在微生物滋生，会污染药品生产用水。环境和设备及设施的表面若清洁消毒不彻底，也会成为微生物的滋生地。

（二）污染途径

污染途径主要包括直接接触传播和间接传播。人员、物料、设备等与洁净区物体表面的直接接触可能导致微生物传播。空气传播是间接传播的主要方式，霉菌孢子可通过空气流动扩散到各个区域。水系统传播则是通过污染的生产用水影响药品质量。

（三）污染类型及典型菌属

污染类型包括细菌污染、真菌污染等。典型菌属方面，人员体表面以革兰氏阳性球菌为主；环境空气和物表常见革兰氏阳性杆菌和真菌；水系统则以革兰氏阴性杆菌为主，且容易形成生物膜。常见的疑难/高抗性微生物有芽孢杆菌、真菌（霉菌）等。

（四）预防措施

加强人员培训，提高人员的微生物控制意识和操作技能，规范更衣、洗手、消毒等流程。严格把控原料质量，确保原料在储存和使用过程中不受污染。定期对空气净化系统进行维护和检测，保证其正常运行。加强纯化水系统的管理和维护，定期进行消毒和检测，去除生物膜。做好环境和设备及设施的清洁消毒工作，制定详细的清洁消毒程序并严格执行。

四、制药GMP车间纯化水系统污染及关联车间霉菌消杀排查

（一）纯化水系统污染排查

制药GMP车间纯化水系统出现污染时，首先对系统进行全面排查。检查水源是否受到污染，水处理设备是否正常运行，管道是否存在泄漏或死角等。通过检测水中的微生物指标，确定污染程度和主要污染菌。

（二）关联车间霉菌消杀

排查发现纯化水系统的污染是由空间环境中的霉菌导致，且涉及关联车间，采用奥克泰士专业方案进行霉菌消杀。奥克泰士高效杀孢子剂，杀灭芽孢、霉菌、霉菌孢子等高抗性微生物。对关联车间的空气、物表等进行全面喷洒或擦拭消毒，确保消毒效果。同时车间的纯化水系统进行一次深度的消毒措施.

（三）奥克泰士方案优势

奥克泰士具有深度清理生物膜的能力，能有效去除纯化水系统中的生物膜，杀灭霉菌、革兰氏阴性菌等微生物，控制需氧菌总数和BC洋葱伯克霍尔德菌、皮氏罗尔斯顿菌等不可接受微生物。经过腐蚀性验证，对不锈钢等材料基本无腐蚀，能极大程度上保障设备和材料寿命。残留性验证表明，消毒完毕后不会存在药剂存留，不会对药品质量产生不良影响。

五、GMP洁净区霉菌污染常见缺陷项分析

（一）清洁消毒不彻底

表现：设备表面、墙壁、地面等清洁不到位，仍残留有可见的污垢、药品残留等，这些都为霉菌生长提供了营养源。消毒过程中，消毒剂浓度不足、作用时间不够或消毒方法不当，导致霉菌未被有效杀灭。

影响：清洁消毒不彻底会使霉菌在洁净区内持续滋生和传播，污染生产环境和药品，增加产品质量风险，可能导致药品微生物超标，影响药品的安全性和有效性。

（二）HVAC 系统问题

表现：空调滤网堵塞、破损，无法有效过滤空气中的霉菌孢子；风道内部清洁不彻底，积聚大量灰尘和微生物，成为霉菌滋生的温床；送回风系统设计不合理，导致气流短路或停滞，使霉菌在局部区域积聚。

影响：HVAC 系统问题会使洁净区空气质量下降，霉菌孢子随空气传播到各个区域，污染产品、设备和人员，严重影响洁净区的微生物控制效果，增加药品生产过程中的污染风险。

（三）人员操作不规范

表现：员工进入洁净区未严格执行人员净化程序，如未洗手、消毒，未更换洁净工作服；在洁净区内未遵守操作规程，如随意走动、触摸设备和产品等，增加了霉菌传播的机会。

影响：人员操作不规范可能将外界的霉菌带入洁净区，并在区内扩散，破坏洁净区的微生物控制环境，对药品质量构成潜在威胁。

（四）监测系统不完善

表现：微生物监测点设置不合理，不能全面反映洁净区的微生物污染情况；监测频次不足，无法及时发现霉菌污染的趋势；监测方法不准确或不规范，导致检测结果不可靠。

影响：监测系统不完善会使企业无法及时掌握洁净区的霉菌污染状况，错过最佳的控制时机，可能导致霉菌污染进一步扩大，影响药品质量和生产的正常进行。

六、洁净区/室霉菌监管标准(国际）

（一）FDA期望

FDA希望制造商实施强有力的环境监测和污染控制计划。在483表格观察报告和警告信中，霉菌发现经常被提及，这通常与清洁不充分或暖通空调（HVAC）缺陷有关。因此，制药企业应加强清洁管理，确保HVAC系统正常运行，以满足FDA的要求。

（二）EMA要求

EMA执行欧盟GMP附件1，该附件对无菌制造环境设定了明确的要求。强调了真菌污染控制的重要性，特别是在HVAC设计、无菌技术和设施卫生方面。制药企业应按照EMA的要求，优化HVAC设计，加强无菌技术培训，做好设施卫生清洁工作。

（三）ISO 14644标准

ISO 14644标准根据允许的颗粒数量提供洁净室的分类级别。虽然主要关注颗粒物，但要符合标准，就需要补充微生物控制程序来解决霉菌和其他微生物问题。制药企业应根据洁净室分类级别，制定相应的微生物控制措施。

（四）USP <797>要求

USP <797>管理配药药房和无菌产品制备，要求对环境进行严格的监测并修复微生物污染，其中霉菌被明确认定为高风险生物。制药企业应按照USP <797>的要求，加强环境监测，及时发现和处理霉菌污染问题。

七、奥克泰士：GMP车间和纯化系统应用-一站式微生物控制方案

（一）去除生物膜

生物膜的危害：在纯化水系统中，生物膜的形成是一个常见且棘手的问题。生物膜是微生物分泌的胞外聚合物将自身包裹形成的一种结构，能够为微生物提供保护，使其对消毒剂、高温等具有更强的抗性。生物膜中的微生物会不断向水中释放，导致纯化水微生物污染超标，影响药品质量，如蜡样芽孢，洋葱菌，罗尔斯顿菌等极易形成生物膜，药典指出需定期清洗消毒预防污染。

奥克泰士的作用：能够深入生物膜内部，破坏其结构，使包裹在其中的微生物暴露出来。其特殊的成分可以分解生物膜的胞外聚合物，从根本上瓦解生物膜的保护作用。通过定期使用奥克泰士对纯化水系统进行消毒处理，可以有效预防和去除生物膜，保障纯化水系统的正常运行。

（二）杀灭多种微生物

针对霉菌芽孢和革兰氏阴性菌：奥克泰士对芽孢、霉菌具有很强的杀灭能力，能够破坏霉菌的细胞壁和细胞膜，抑制其生长和繁殖。同时，对于纯化水中常见的革兰氏阴性菌，如假单胞菌等，奥克泰士也能通过氧化作用迅速杀灭。在实际应用中，可有效控制纯化水中这些微生物的数量，确保纯化水符合药品生产的质量要求。

控制需氧菌总数和不可接受微生物：奥克泰士能够全面控制纯化水中的需氧菌总数，使其维持在较低水平。对于一些不可接受微生物，如洋葱伯克霍尔德菌群（Bcc）、罗尔斯通氏菌等，奥克泰士同样具有良好的杀灭效果。通过定期使用奥克泰士对纯化水系统进行消毒，可以有效降低这些微生物对药品质量的潜在风险。

（三）腐蚀性验证

对设备材料的影响：在制药生产中，纯化水系统的设备通常采用不锈钢等材料。奥克泰士经过严格的腐蚀性验证，对不锈钢等常用材料基本无腐蚀。这意味着在长期使用奥克泰士对纯化水系统进行消毒的过程中，不会对设备造成损坏，极大程度上保障了设备的使用寿命，降低企业的设备维护成本。

（四）残留性验证

药品生产的严格要求：在药品生产中，对消毒剂的残留要求极为严格。残留的消毒剂可能会与药品发生反应，影响药品的质量和安全性。因此，选择无残留的消毒剂至关重要。

奥克泰士的优势：经过残留性验证，消毒完毕后不会存在药剂存留。在对纯化水系统进行消毒后，经过检测，水中无奥克泰士残留，不会对纯化水的质量产生任何不良影响。这一特性使得奥克泰士非常适合在制药纯化水系统中使用，确保了药品生产过程的安全性和可靠性。

（五）公司核心优势：

1. 制药用水消毒专家：丰富的微生物治理实践经验（专业工程师团队，丰富的处理经验，案例数据库等）
2. 杀孢子剂、除生物膜消毒剂（德国品质）
3. 检测验证资料支持，去除生物膜，霉菌、芽孢、洋葱伯克霍尔德菌，罗尔斯顿菌等，腐蚀性和残留验证。
4. GMP车间消毒灭菌、纯化水微生物应用服务商和技术方案提供商，以解决客户问题和需求为目标。
5. 医用水系统控制不可接受微生物的必要耗材。