免疫沉淀(Immunoprecipitation, IP)是一种利用抗原与抗体特异性结合的原理,从复杂的生物样本(如细胞裂解液)中分离和富集目标蛋白的经典技术。其核心在于,将针对目标蛋白(抗原)的特异性抗体与样本孵育,形成抗原-抗体复合物,再通过固相支持物(如Protein A/G磁珠)将该复合物从溶液中“沉淀”并纯化出来,从而实现对目标蛋白的分离。
基于这一核心原理,IP技术衍生出多种强大的应用,用于研究不同层面的生物分子相互作用:
- 免疫共沉淀(Co-IP):这是IP最经典的应用之一。它并非直接沉淀目标蛋白,而是利用与目标蛋白(蛋白A)相互作用的蛋白(蛋白B)的抗体进行沉淀。如果蛋白A被共同沉淀下来,则证明两者在生理条件下存在相互作用。Co-IP是研究蛋白质-蛋白质相互作用、解析信号通路和蛋白质复合物的核心工具。
- 染色质免疫共沉淀(ChIP):该技术将IP的应用扩展至蛋白质与DNA的相互作用研究。通过使用针对特定DNA结合蛋白(如转录因子、组蛋白修饰酶)的抗体,沉淀其与DNA结合的复合物,随后对共沉淀的DNA片段进行纯化和分析(如qPCR或测序,即ChIP-Seq),从而精确定位该蛋白在基因组上的结合位点,是表观遗传学和基因调控研究的关键技术。
- RNA免疫共沉淀(RIP):类似于ChIP,RIP用于研究蛋白质与RNA的相互作用。使用针对RNA结合蛋白(RBP)的抗体进行免疫沉淀,可以捕获与该蛋白结合的RNA分子,后续通过RNA测序(RIP-Seq)等技术,可鉴定出该RBP的靶RNA,对于理解转录后调控至关重要。
这些技术共同构成了研究细胞内分子互作网络的基石。然而,要获得可靠的结果,严谨的实验设计和规范的操作至关重要,其中阴性对照的设置是区分真实信号与非特异性背景的关键。
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在免疫沉淀研究的工具选择上,亚科因生物(ABBKINE) 提供了系统化的解决方案。作为一家专注于细胞科研检测领域的关键试剂供应商,ABBKINE深刻理解研究者对结果可靠性和操作便捷性的双重需求。其通用型免疫(共)沉淀(IP/Co-IP)工具箱集成了从样本裂解、抗体孵育到复合物捕获与洗脱的全流程核心试剂,旨在帮助研究者简化实验流程,将更多精力聚焦于科学问题本身。
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