小鼠卵巢储备衰退模型构建简介

小鼠卵巢储备衰退模型

前言

小鼠卵巢储备衰退（Ovarian Reserve Decline, ORD）是指小鼠卵巢内原始卵泡、生长卵泡数量减少，卵母细胞质量下降，伴随卵巢内分泌功能减退的病理生理过程，是生殖医学、衰老研究及女性生殖健康相关机制研究的核心模型之一（小鼠是模拟人类卵巢早衰、衰老相关卵巢功能减退的经典模式生物）。

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01 构建方法

一、化学诱导模型

1. 环磷酰胺（CTX）联合白消安（Bu）方案

机制：CTX 通过烷基化损伤 DNA，诱导原始卵泡提前激活并闭锁；Bu 则直接破坏卵母细胞和颗粒细胞。

剂量与操作：

C57BL/6 小鼠：单次腹腔注射 CTX 120 mg/kg + 皮内注射 Bu 12 mg/kg，可显著降低卵巢储备（卵泡密度降至对照的 37%），同时保留部分生育力，适用于化疗后残留卵巢功能研究。

昆明鼠：腹腔注射 CTX 40 mg/kg 连续 5 天，可观察到体重减轻、精子数量减少（雄性模型），提示雌性可能需调整剂量。

评估指标：卵巢组织学（原始 / 窦卵泡计数）、血清 AMH（抗缪勒管激素）降低、动情周期紊乱（动情期缩短或消失）。

优势：操作简便、周期短（2-4 周），可模拟医源性卵巢损伤；残留卵泡质量未受显著影响，适合卵巢保护策略研究。

参考文献-Study on the effects and mechanisms of Wenzhong Bushen Formula in improving ovarian reserve decline in mice based on network pharmacology

2. 雷公藤多苷（TWP）模型

机制：抑制颗粒细胞增殖和甾体激素合成，诱导卵泡闭锁。

剂量：50 mg/kg 灌胃 14 天，可致卵巢指数降低、AMH 和雌激素水平下降，卵母细胞成熟率减少。

特点：副作用较少，但需长期给药，适合研究慢性卵巢损伤。

二、自然衰老模型

1. 自然衰老

方法：饲养 C57BL/6 小鼠至 9-12 月龄（相当于人类围绝经期）。

特征：卵巢纤维化加剧、免疫细胞浸润（淋巴细胞比例增加 1 倍）、胶原酶（MMP2）表达下调导致胶原沉积。

优势：接近人类生理衰老过程；缺点是周期长，个体差异大。

三、基因编辑模型

1. 关键基因敲除

miR-199b-5p 敲除：通过 CRISPR-Cas9 技术构建，表现为产仔数减少（平均每窝 6.43 vs 8.15 只），卵巢中 H12 基因表达升高，RS13 和 RL6 基因表达降低，提示 DNA 损伤修复和核糖体功能异常。

FoxO3a 卵巢特异性敲除：原始卵泡过度激活，导致储备提前耗竭，模拟遗传性卵巢早衰。

优势：机制明确，可模拟遗传性 DOR；缺点是技术门槛高，周期长（需 2-3 个月）。

2. 衰老相关基因干预

CD38 敲除：通过减少 NAD + 消耗，逆转卵巢衰老相关的细胞通讯异常和纤维化，适用于抗衰老机制研究。

四、其他模型

1.半乳糖模型

机制：35% 半乳糖饮食诱导氧化应激，导致卵泡耗竭和卵巢纤维化。

评估：卵巢重量减轻、E2 降低、FSH 升高，输卵管成熟卵母细胞数减少。

注意：需结合肝脏损伤评估（如肝组织 HE 染色），避免代谢副作用干扰。

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02 文献分享

参考文献：Study on the effects and mechanisms of Wenzhong Bushen Formula in improving ovarian reserve decline in mice based on network pharmacology

中文翻译：基于网络药理学的温中补肾方改善小鼠卵巢储备衰退的作用及机制研究

期刊：《Journal of Ethnopharmacology》 ( IF 5.4/Q1 )

民族药理学相关性：温中止肾方（WZBSF）是一种传统中药经验方，以益气、健脾、温肾、壮阳、活血、调经为主要功效。临床证据表明，其通过改善卵巢储备功能，在治疗卵巢储备功能减退（DOR）方面具有显著疗效。然而，温中止肾方具体的药理作用机制仍不明确。

研究目的：本研究旨在通过网络药理学和动物实验，探究温中止肾方改善卵巢储备功能下降的作用机制。

材料与方法：采用超高效液相色谱-串联质谱（UPLC-MS/MS）和气相色谱-质谱（GC-MS）联用平台对温中止肾方进行分析。从中药系统药理学数据库与分析平台（TCMSP）获取温中止肾方的有效成分及靶点，并通过通用蛋白质资源数据库（UniProt）进行标准化处理。从基因卡片数据库（GeneCard）、在线人类孟德尔遗传数据库（OMIM）、药物基因组学知识库（PHARMGKB）和人类疾病基因数据库（DisGeNET）收集疾病靶点，并对两组靶点进行交叉比对。利用 cytoscape3.9.1 软件和STRING数据库构建蛋白质-蛋白质相互作用（PPI）网络，随后通过Metascape数据库进行京都基因与基因组百科全书（KEGG）和基因本体（GO）富集分析。最后，建立小鼠卵巢储备功能下降模型，给予不同剂量的温中止肾方，通过血清激素检测、苏木精-伊红（H&E）染色、免疫荧光（IF）、免疫组织化学（IHC）及蛋白质印迹分析（WB）进行实验验证。

结果：温中止肾方与卵巢储备功能下降存在145个共同靶点。GO富集分析显示，其涉及激素刺激反应、磷酸酶结合等生物学过程；KEGG分析表明，其与磷脂酰肌醇3-激酶-蛋白激酶B（PI3K-AKT）信号通路、叉头框蛋白O（FoxO）信号通路等相关。在卵巢储备功能下降的小鼠中，温中止肾方恢复了体重增长率，提高了卵巢指数，使动情周期恢复正常，逆转了血清激素失衡，恢复了各类卵泡数量，并改善了卵巢形态。此外，温中止肾方降低了磷酸化蛋白激酶B（p-AKT）和磷酸化叉头框蛋白O3a（p-FOXO3a）的水平，防止了原始卵泡的过度激活，维持了卵巢储备功能。

结论：温中止肾方可改善环磷酰胺和白消安诱导的卵巢储备功能下降，其机制可能与抑制PI3K/AKT/FOXO3a信号通路有关。

实验流程图

1、网络药理学预测WZBSF治疗DOR的潜在机制。

2、不同处理组小鼠给药后的一般状况。

3、不同组小鼠发情周期及血清激素水平的变化。

4、不同组的卵巢形态学和卵泡计数。

5、不同组的卵巢储备状态。

6、WZBSF通过PI3K/AKT/FOXO3a信号通路改善DOR小鼠卵巢功能。

7、本研究机制示意图。

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