实验样本处理需严谨操作:
1. 血清:室温血液自然凝固10-20分钟,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如出现沉淀,应再次离心。
2. 血浆:应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂,混合10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应该再次离心。
3. 尿液:用无菌管收集,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。
4. 细胞培养上清:检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。检测细胞内的成份时,用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
5. 组织标本:对于样本要求保持鲜重,称取样本中的重量不小于50mg,一般以1g为基准,但不严格要求固定样本每个重量必须达到相同的水平。匀浆的比例选取10%,相当于1g组织加9ml的匀浆液来进行匀浆。匀浆液选取PBS(PH=7.2-7.4,浓度为0.01mol/L),匀浆过程选用组织匀浆器,冰浴上匀浆。(或者进行液氮碾磨),离心取上清,离心转速选用5000转每分,时间是15分钟。取上清液待检!
6.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融
不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
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