耳目一新！这篇多层次、多条件的文库筛选，找到了调控 NK 细胞的关键靶点！

NK细胞是肿瘤免疫治疗的关键细胞之一。2025 年 8 月 ，Cancer Cell 期刊发表题为Genome-wide CRISPR screens identify critical targets to enhance CAR-NK cell antitumor potency 的研究论文，通过全基因组 CRISPR 筛选，发现并鉴定了能够增强 CAR-NK 细胞抗肿瘤潜力的关键靶点——MED12、ARIH2 和 CCNC，为开发下一代 NK 细胞疗法提供了宝贵的资源。

Fig1.构建CRISPR筛选平台，并鉴定PRDM1和RUNX3作为NK细胞功能的负调控因子。A: 展示了sgRNA递送的病毒载体结构，包含U6启动子、sgRNA scaffold、嘌呤霉素抗性基因和BFP报告基因。B: 实验流程图，说明在两种条件下（有/无饲养细胞；与胰腺癌细胞共培养）进行TF库筛选。C, D: 在两个供体中，筛选出的显著富集或耗竭的TF基因（z-score转换的log2FC），颜色表示在不同筛选条件下的重叠情况。E: PRDM1和RUNX3在不同条件下sgRNA富集情况，显示其在不同压力下的一致性。F: 耗竭基因Reactome通路富集分析，揭示IL和JAK-STAT通路对NK细胞存活至关重要。G: Upset图展示Top 50富集TF在不同筛选条件下的重叠情况，PRDM1和RUNX3在多个条件下重叠。 H: 富集TF通路分析，提示TP53通路可能被靶向，以增强NK功能。I: 单细胞数据验证。PRDM1和RUNX3在胰腺癌患者NK细胞中高表达，与健康人相比有显著差异。

Fig2.全基因组CRISPR筛选揭示在肿瘤压力下增强NK细胞功能的调控因子，并通过患者的数据验证其临床意义，为后续功能验证提供候选靶点。

Fig3. 在免疫抑制微环境（TME）压力下的全基因组筛选。

Fig4. 通过整合多条件筛选数据，提炼出最具转化潜力的共同靶点，为其后续功能验证和机制研究提供依据。

Fig5.验证MED12作为负调控因子的功能，其缺失能显著提升NK细胞在不同肿瘤模型中的杀伤能力，尤其在与CAR联合时效果更佳。

Fig6.揭示ARIH2和CCNC通过调控代谢和表型状态协同增强NK细胞功能，双敲效果优于单敲。

Fig7.双敲ARIH2/CCNC增强CAR-NK细胞的体内疗效，证实双敲策略在体内同样有效，能显著提升NK细胞的浸润、活性和抗肿瘤效果。

Fig8.ARIH2与CCNC双敲协同增强NK细胞增殖、激活与细胞因子应答。从机制上阐明双敲通过协同调控多个信号通路，将NK细胞重编程为高度激活、代谢适应性强、细胞因子高应答的状态。

本研究通过 多层次、多条件的CRISPR筛选平台，系统性地鉴定了MED12、ARIH2、CCNC等关键负调控因子，并通过体内外功能验证、代谢分析、单细胞测序等手段，阐明其通过调控转录、泛素化、代谢等过程增强NK细胞功能。尤其双敲ARIH2/CCNC表现出显著的协同效应，为下一代CAR-NK细胞的临床转化提供了强有力的候选策略。这项研究不仅填补了人原代NK细胞全基因组筛选的空白，也为克服肿瘤微环境抑制、提升细胞疗法疗效提供了新的理论基础和工程化路径。