复杂样品成像不再翻车！这本荧光显微手册一次讲透 4 大观察法（限 200 本）

做显微成像是不是有过这样的崩溃经历：想要观察神经组织结构，厚样品一上镜，组织边缘立刻冒出一圈「佛光」，整幅画面一片亮雾；切成微分干涉，塑料皿一放进光路就偏振翻车，图像拉丝到怀疑人生……

方法没选对，再用心苦干也是白搭。不同的成像方法原理不同，适用的场景也不同。我们把相衬、微分干涉、调制对比、渐变对比四种热门成像方法拉进同一张表：谁能和塑料皿和平共处？谁能在厚样品里留住细节？谁最省预算最好上手？一目了然，让你少走弯路，直接把细胞拍成大片。

表 1. 观察方法的比较

除此之外，我们还整理了共聚焦显微镜在深层组织、脑组织、神经血管观察成像的实战案例，从操作应用到成像分析一网打尽，更有顶刊前沿文献汇总，打开思路上高分！现在扫码即可免费领取丁香实验联合奥伟登（Evident）定制的「神经生物学显微成像实操手册」实体手册，限量200本。还将随机抽取5位幸运用户，送出品牌定制显微镜模型。机不可失，立即参与吧～

手册内容抢先看：

相衬方法的变化

图 1 通过相应的光学元件排列简要说明了无需染色即可观察透明物体的常见相位可视化方法。传统的相位可视化方法通过在聚光镜光瞳和物镜光瞳中分别放置特定光学元件来实现。

图 1. 各种相位可视化方法的光路布置。

各种相位可视化方法的必要光学元件。a. 相衬方法；b. 微分干涉方法；c. 调制对比方法；d. 渐变对比方法。

相衬方法（图 1a）组合使用带环状孔径的专用聚光器透镜和含有相位膜环的专用物镜透镜。在通过聚光镜环状孔径的光线中，那些直接通过样品的光线会通过物镜光瞳的相位膜。另一方面，被样品偏转的光线在相位膜外通过，从而在两个分量相互干扰的点产生明暗对比。这一过程的典型特征是，在样品的折射率分布发生变化的梯度处会出现光晕现象。厚样品不适合采用这种方法，因为会出现过强的光晕。

微分干涉方法（图 1b）是一种偏振剪切干涉仪，在聚光镜光瞳和物镜光瞳位置装有互补的沃拉斯顿棱镜。样品图像变为在固定方向上略微偏移的重像，并且样品的折射率梯度带有阴影，使其看起来具有三维立体感。由于采用了偏光干涉，如果有塑料皮氏培养皿或其它物体在光路中造成偏振失真，则无法进行观察。

调制对比方法（图 1c）利用聚光镜光瞳的狭缝开口将照明光束限制在一个方向。引导光束会使样品中光的直线部分呈现灰色，而由于物镜光瞳的调制器，折射部分的对比度将根据折射方向而变化。通过透射或屏蔽部分光，可以获得类似于微分干涉图像的三维图像。由于调制对比方法中不使用偏光，可以使用皮氏培养皿之类的塑料容器。但使用这种方法时分辨率略有下降，因为限制照明光束的方向意味着照明数值孔径（NA）较小。

宝典中还详细介绍了渐变对比方法的原理、渐变对比方法的特性以及配制方法，手把手教你拍出好图，还有透明化标本的深层组织观察应用、四重免疫荧光应用等实战详解，小伙伴们抓紧领取手册，快速上手，拿下荧光结果吧！

内容策划：潘成

内容审核：朱卿

题图来源：奥伟登（Evident）