无菌质控时速革命：qPCR 2小时锁定细菌/真菌/支原体

传统无菌检测的“金标准”：14天培养的科学逻辑

在生物制药领域，"无菌"二字承载着千钧之重。从疫苗到单克隆抗体，从血液制品到细胞治疗产品，任何微生物污染都可能导致批次报废、临床风险飙升，甚至威胁患者生命。对生物制药企业而言，确保产品质量不仅是生产的基本要求，更是保障患者安全、维护企业声誉、符合法规要求、推动行业创新以及适应市场需求的关键所在，而其中无菌检测作为产品质量控制的核心环节尤为重要。

药典规定传统无菌检测方法（薄膜过滤法与直接接种法）作为"金标准"，其强制14天培养周期源于微生物学的客观规律：

• 特定慢增殖微生物（如兼性厌氧的产气荚膜梭菌、需复杂营养的真菌黑曲霉）在模拟人体环境的培养基中生长缓慢，需持续培养至14天方可被可靠检出；

• 保守检测策略：要求覆盖最慢生长微生物的增殖周期，确保“零漏检”安全性。

时效性之困：短周期生物制品的检测难题与破局挑战

然而，这一严谨性正与日益增长的生物制品时效性需求形成根本性冲突，尤其对于以下几类关键产品而言，漫长的等待期不仅意味着效率的损失，更潜藏着巨大的质量风险与临床危机：

短效细胞治疗及移植产品受检测周期冲击显著：CAR-T疗法从采集到回输仅7天，但14天检测未完成时改造T细胞已失活；TCR-T、NK细胞疗法亦受7-14天制备周期限制。更严峻的是，部分新鲜造血干细胞移植样本活性仅维持数小时至数天，与14天检测周期完全冲突。

mRNA疫苗冷链管理矛盾突出：需-70℃超低温储存且对温度波动敏感，14天等待期延长冷链故障风险，检测过程本身还加速了疫苗的降解。

稳定性差蛋白类药物（如戈谢病酶制剂、血友病重组凝血因子）在溶液中半衰期仅数小时至数天，14天检测导致活性显著衰减，既丧失疗效，还可能因蛋白结构改变引发安全隐患。

其他短存活期产品（如活体微生物制剂、AAV病毒载体、卡介苗、解冻后4小时内使用的凝血因子复合物）因活性成分存活窗口极短（数小时至数天），亟需时效性检测以避免快速失效。

传统长周期检测不仅拖慢产品上市节奏，更在等待中埋下质量隐患：若检测发现质量问题，前期投入将付诸东流，且延误患者治疗。部分企业尝试用《9406指导原则》推荐的呼吸信号法（压缩至5-7天）缓解矛盾，但该法设备成本高、操作复杂，对中小企业形成技术壁垒，难以满足细胞治疗、mRNA疫苗等领域"当日放行"的迫切需求。

新规护航：qPCR解锁无菌快检新纪元

随着《中国药典》2025版将分子检测技术正式纳入附录，行业技术升级进程显著加速。新修订的《9201药品微生物检验替代方法验证指导原则》明确赋予三类技术法定地位：核酸扩增技术（如实时定量PCR）、基因指纹分析（如毛细管电泳）、全基因组测序技术（如NGS）。

这些分子检测技术作为传统药典方法的替代，是对药品微生物质量控制方法的创新与拓展。这些技术通过原理创新（突破微生物培养限制）与效能跃迁（检测速度提升10倍级），重构了无菌质控范式，为解决传统方法检测周期长的问题提供了可能。特别是在无菌检查这类定性试验中，qPCR无菌快速检测技术凭借其快速识别活微生物的能力，显著缩短了检测时间，从而大幅提升了生产效率。

技术解码：qPCR从原理到突破

qPCR（Quantitative Polymerase Chain Reaction）即定量聚合酶链反应，是一种在PCR扩增过程中，通过监测荧光信号变化实时检测每个循环的扩增产物量，从而对起始模板进行定量的方法。根据荧光产生原理的不同，qPCR主要分为两类：核酸结合染料法（如SYBR Green I，简称染料法）和基于水解探针的化学法（如TaqMan，简称探针法）。

下图直观显示了两种方法的检测原理：

qPCR技术在细胞类生物制品无菌放行检测中优势显著：

1.灵敏度高、特异性强：可精准识别低拷贝目标核酸（如残留病毒、支原体），大幅降低漏检风险，源头保障安全。

2.快速高效：检测流程（提取、扩增、分析）数小时完成，远快于传统培养法的数天至数周，有力支持快速放行。

3.操作简便：流程标准化程度高，仪器需求低，降低实验门槛和成本，适合高通量处理。

4.定量稳定：精确量化目标分子（如污染物或特定基因），提供客观质量数据；优异重现性确保批次间结果稳定可靠，为产品质量一致性和长期安全性提供坚实依据，是保障细胞制品安全有效的理想技术。

解决方案

友康生物2小时快检体系

友康生物科技（北京）股份有限公司，成立于2006年，基于19年在无血清细胞培养与分子诊断领域的技术积淀，友康生物开发了覆盖细菌、真菌及支原体检测的快速无菌检测试剂盒系列。该系列产品采用国际主流的TaqMan探针法技术路径，通过多通道荧光探针的创新组合：

• 细菌检测：使用FAM（目标序列）和ROX（内参对照）双通道探针

• 真菌与支原体检测：使用FAM（目标序列）和HEX（内参对照）双通道探针

以2小时极速检测突破传统14天培养周期的瓶颈，在大幅提升检测效率的同时，确保高灵敏度与广谱环境污染物精准筛查。其通过"一提三检"技术（细菌、真菌、支原体一体式核酸提取试剂盒+三种微生物检测试剂盒实现"一次提取，三种检测"），结合特异版/广谱版灵活选择，构建高度合规的微生物快检体系。该体系严格满足中国药典、美国FDA及欧洲药典等全球标准，通过双荧光探针的协同作用既实现目标微生物的精准检测，又确保检测过程的质量控制，为细胞治疗产品提供兼具速度革命、精准靶向与全链条无菌保障的本土化解决方案。

细菌、真菌、支原体专用核酸快速提取试剂盒

友康生物研发的细菌、真菌、支原体专用核酸快速提取试剂盒，适用性强，提取得到的核酸，可搭配本公司细菌、真菌和支原体三种核酸检测试剂盒进行使用。操作方便，样本处理能力强，最快三步操作，可在四十分钟内完成核酸的提取。

细菌、真菌、支原体专用核酸提取试剂盒（磁珠法）

友康生物研发的细菌、真菌、支原体专用核酸提取试剂盒，适用性强，提取得到的核酸，可搭配本公司细菌、真菌和支原体三种核酸检测试剂盒进行使用。搭配扩展包，排除干扰，只检活菌。

两款核酸提取试剂盒性能对比

细菌检测试剂盒（qPCR法）特异版＆广谱版

友康生物研发的细菌检测试剂盒（qPCR法）特异版＆广谱版，基于荧光定量 PCR（Taqman 探针法）技术，经过充分验证，可在2小时内定性检测如培养基、细胞培养物以及生物制品中是否有细菌污染。

已参照qPCR微生物定性检验方法进行验证（下表）

真菌检测试剂盒（qPCR法）特异版＆广谱版

友康生物研发的真菌检测试剂盒（qPCR法）特异版＆广谱版，基于荧光定量 PCR（Taqman 探针法）技术，经过充分验证，可在2小时内定性检测如培养基、细胞培养物以及生物制品中是否有真菌污染。

已参照qPCR微生物定性检验方法进行验证（下表）

支原体检测试剂盒（qPCR法）

支原体检测试剂盒（qPCR法）基于荧光定量 PCR 技术，采用多重 PCR 的方法定性检测培养基、细胞培养物以及生物制品中是否有支原体污染。本试剂盒可检测的支原体种类涵盖范围广，具备灵敏度高、特异性好，稳定性好等特点，与支原体进化树上的近缘物种、其他常见细菌、真菌以及细胞DNA均无交叉反应。

两小时革命：从检测台到患者床边的生命加速

当无菌检测从“两周”压缩至“两小时”，生物制药行业获得的不仅是效率提升，更是对生命的重新敬畏。qPCR技术正在重塑的不仅是质控标准，更是整个产业对安全与速度的平衡哲学——这场始于检测台的革命，终将抵达每一个等待救治的患者床边。

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